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液相色谱（LC）

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主题：【已应助】液相标准品不出峰问题

浏览0 回复7 电梯直达

Ins_862f5f42

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发表于：2022/03/17 15:58:23 楼主管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

流动相是乙腈和0.1%磷酸水，
空白溶剂是50%甲醇水

对照品为6种标准品的混标:
分别跑了初始5％，10％，20％，到50％盐的梯度，倒过来的梯度也跑了，都是只有3分钟前出一个大峰和多个连在一起的小峰。

还分别跑了20%，30%，40%，50%，60%，70%，80%，90%乙腈的等度都跑了除了等度50%的在3分钟后有出峰，其他的都在3分钟前出大峰和一些小峰。随着乙腈增加，峰是有微小的前移变化，但是都在3分钟前出峰。

文献中查到的标准品色谱条件，分别有乙腈从5%10%20%逐步梯度到50%，跑30分钟，出峰时间都适中在10～20分钟左右。

然后昨天也另外完全按其中一个单标国家药典（甲醇：水=25:75）的方法（除了溶剂不同，药典是乙醇，我们是50%甲醇水）跑了一针，也是只有2分钟左右的空白溶剂相同的大峰。

多种方法跑的空白溶剂，出的大峰，是在2.4分钟左右出现。

看了出峰的柱效，没有超过3000的，大多在1000左右。
这是色谱柱的问题吗，还是流动相ph的影响，会影响那么大吗，怎么调都分不开，像色谱柱完全没有保留能力。

推荐答案：安平回复于2022/03/17

楼主具体分析什么物质？浓度有多高？

详细说说具体的情况为好。详细说说具体的分析条件为好。

目前使用了什么型号的色谱柱？

如果是C18柱，那么可以首先提高流动相中水的组成设置梯度实验，样品溶剂中的有机溶剂含量要尽可能低。

如果怀疑灵敏度问题，可以先进样浓度较高的样品。

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安平

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2022/3/17 22:53:21 沙发管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

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Ins_862f5f42

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2022/3/18 0:32:06 板凳管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

原文由 安平(byron1111) 发表: 楼主具体分析什么物质？浓度有多高？详细说说具体的情况为好。详细说说具体的分析条件为好。目前使用了什么型号的色谱柱？如果是C18柱，那么可以首先提高流动相中水的组成设置梯度实验，样品溶剂中的有机溶剂含量要尽可能低。如果怀疑灵敏度问题，可以先进样浓度较高的样品。

是C18柱子，跑过0.2mg/ml浓度的，也跑过20ug/ml的，单标混标都跑过，梯度从磷酸盐5%梯度到50%，都是只有2分钟左右的峰，物质是极性小分子物质，中药相关的。
只用过这个柱子，之前一直以为是梯度设置问题，然后设置了各种等度梯度，都是只有2分钟左右3分钟前的峰。还没来得及换柱子试试。

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Ins_862f5f42

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2022/3/18 0:42:33 马扎管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

原文由 Ins_862f5f42(Ins_862f5f42) 发表:是C18柱子，跑过0.2mg/ml浓度的，也跑过20ug/ml的，单标混标都跑过，梯度从磷酸盐5%梯度到50%，都是只有2分钟左右的峰，物质是极性小分子物质，中药相关的。只用过这个柱子，之前一直以为是梯度设置问题，然后设置了各种等度梯度，都是只有2分钟左右3分钟前的峰。还没来得及换柱子试试。

写错了，5%乙腈到50%，
色谱条件: 色谱柱:HC- C18柱，流动相:A相为乙腈溶液，B相为质量分数0.1%的磷酸溶液，采用梯度洗脱30min,乙腈与磷酸溶液体积比从5:95至50:50;波长:330 nm;流速: 1 mL/min; 柱温: 30 °C;进样量:10μL。

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