原文由 haohaoxuexi333 发表:
那你当时加入的20.0g的对氨基苯磺酰胺全溶了吗?
问下,是否可以用对氨基苯磺酸来代替它呢?
有资料介绍测定蔬菜的亚硝酸盐氮,其中就用的对氨基苯磺酸,但是使用冰醋酸维持弱酸环境。以下是我们根据资料介绍编写的实验教材,供参考:
实验二十二 蔬菜亚硝酸盐含量测定
1 分析意义
蔬菜亚硝酸盐含量虽然很少或痕量,但它与蔬菜品质和人体健康有很大关系。亚硝酸盐是致癌物亚硝胺生成的主要物质,收获贮存的蔬菜亚硝酸盐会增加。因此测定蔬菜亚硝酸盐含量是环境生物检测项目之一。
2 目的
2.1 掌握亚硝酸盐的提取方法;
2.2 了解亚硝酸盐的测定原理;
2.3 掌握亚硝酸盐的测定方法;
3 原理
用氨性缓冲液(pH9.6-9.7)提取蔬菜(或其它食品)亚硝酸离子经处理制取的清滤液,在弱酸性条件下,亚硝酸离子与氨基苯磺酸重氮化后,再与N-—1—萘基)—乙二胺偶合形成紫红色染料,与标准在550nm波长下测定含量。
4 试剂
4.1 氯化铵缓冲液
1L容量瓶中加入500ml水,准确加入20.0ml盐酸(HCl),混匀。准确加入50ml氢氧化铵(NH4OH),用水稀释至刻度,必要时用盐酸和稀氢氧化铵调节至pH9.6-9.7。
4.2 硫酸锌溶液,0.42mol/L
称取120g硫酸锌(ZnSO4•7H2O C.P),用水稀释至1000ml。
4.3 氢氧化钠溶液,20g/L
称取20g氢氧化钠用水溶解,稀释至1L。
4.4 对氨基苯磺酸溶液
称取10g对氨基苯磺酸(C6H7O3NS)溶于700ml水和300ml冰乙酸中,置棕色瓶中,混匀,室温保存。
4.5 N—(1—萘基)—乙二胺溶液,1g/L
称取0.1g N—(1—萘基)—乙二胺(C10H17NHCH2CH2NH2•2HCl),加60%乙酸(4.9)溶液并稀释至100ml,混匀,置棕色瓶在冰箱保存,一周内稳定。
4.6 显色剂:依用量多少在临用前将N—(1—萘基)乙二胺溶液(4.5)和对氨基苯磺酸溶液(4.4)等体积混合。
4.7 亚硝酸钠标准溶液:准确称取150.0mg于硅胶干燥器中干燥24小时的亚硝酸钠(NaNO2,A.R),加200ml氯化氨缓冲溶液(4.1),加水稀释至刻度,混匀。在4℃避光保存。此溶液浓度为100μg/ml亚硝酸离子。
4.8 亚硝酸钠标准使用液:临用前配置。吸取亚硝酸钠标准溶液(4.7)3.00ml置于100ml容量瓶中,加水稀释至刻度。浓度为3.00μg/ml亚硝酸离子。
4.9 乙酸(60%):取冰醋酸60ml加水40ml,混匀。
5 仪器
5.1 组织捣碎机;
5.2 分光光读计;
5.3 25ml带塞比色管;
5.4 可控温水浴锅
6 操作方式
6.1 样品处理
用烧杯于百分之一准确度天平上称取经捣碎之后的样品10.00g,加70ml水和12ml氢氧化钠溶液(4.3),混匀,移至250ml容量瓶中加10ml硫酸锌溶液(4.2)混匀,如不产生白色沉淀,再补加2-5ml氢氧化钠(4.3),混匀,置60℃水浴中加热10min,取出冷至室温,加水至刻度,混匀,静置0.5小时,用滤纸过滤,去弃最初滤液,收集滤液供测定。
6.2 测定
6.2.1 亚硝酸钠标准曲线的制备
6.2.1.1 配制标准系列
准确吸取0.00、0.500、1.00、2.00、3.00、4.00、5.00ml亚硝酸钠标准使用液(4.8)分别置于25ml带塞比色管中,该标准系列含NO2-为0.0、1.50、3.00、6.00、9.00、12.0、15.0μg。
6.2.1.2 显色比色
于各管中分别加入4.5ml氯化铵缓冲液(4.1)2.5ml 60%乙酸(4.9)后立即加入5.0ml显色剂,加入至刻度,混匀,在暗处静置25min。将分光光度计波长调到550nm。以标准零浓度为参比测定系列标准的吸收度。以吸光度与NO2量(μg)-统计回归标准曲线。
6.2.2 样品测定:吸取10.0ml上述滤液(6.1)于25ml带塞比色管中,以下步骤同(6.2.1.2)。同时做空白试验。
7 计算
式中:m1——样品质量,g;
m2——用曲线计算的测定用样液中亚硝酸盐质量,NO2-,µg;
V1——样品处理液总体积,mL;
V2——测定用样液体积,mL
8 注意事项
8.1 样品中蛋白质及含氮有机物等会使试液混浊,可加入ZnSO4形成沉淀而除去。
8.2 蔬菜类均含有抗坏血酸,当共存物含抗坏血酸100µg时会严重干扰显色强度,可加入活性碳去除。
8.3 蔬菜活体离体后硝酸还原酶会还原硝酸离子为亚硝酸离子,因此,采样后应尽快制样测定或采取减缓酶活动措施,已打碎的样品可采取加热制止酶的活动。