1 酸枣仁中总皂苷和总黄酮定量分析方法的建立

酸枣仁总皂苷定量分析方法的建立

取酸枣仁皂苷A对照品和样品液适量，置具塞试管中，挥干溶剂，加入新鲜配置的5 %香草醛-冰醋酸溶液0.2 mL，高氯酸0.8 mL，加塞，60 ℃水浴中反应15 min，取出，冷却至室温，加5 mL冰醋酸，摇匀，外标两点法于592 nm下测定吸光度，计算含量。

酸枣仁总黄酮定量分析方法的建立

取芦丁对照品和样品液适量，置25 mL量瓶中，加入浓度为0.2 moL· L^-1的三氯化铝溶液2.5 mL，再加浓度为1 moL· L^-1的醋酸钾溶液5.0 mL，用水定容至25 mL，外标两点法在272 nm处测定吸光度，计算含量。

2 溶液的制备

对照品溶液的制备

取酸枣仁皂苷A对照品适量，精密称定，置5 mL量瓶中，加甲醇溶解，并稀释至刻度，摇匀，制成浓度为0.45 mg · mL^-1酸枣仁皂苷A对照品储备液。

取芦丁对照品适量,精密称定，置25 mL量瓶中，加甲醇溶解，并稀释至刻度，摇匀，制成浓度为0.19 mg · mL^-1芦丁对照品储备液。

供试品溶液的制备

称取酸枣仁药材约15 g，精密称定，置圆底烧瓶中，石油醚回流提取2次，每次2 h，弃去石油醚，挥干药渣，根据正交设计的工艺采用加热回流提取，放冷至室温，提取液过滤，润洗残渣，合并滤液，蒸干溶剂，残渣全部转移至50 mL量瓶中，用70 %乙醇稀释至刻度，摇匀，即得。

3 标准曲线的绘制

酸枣仁总皂苷标准曲线

精密量取酸枣仁皂苷A对照品溶液0，0.1，0.2，0.4，0.6，1.0 mL，按“1”项下 “置具塞试管中”中操作，在595 nm波长处测定吸光度，以吸光度为纵坐标，质量为横坐标，绘制标准曲线。得到回归方程为 Y =1.992X - 0.0002，r = 0.9998，线性范围为45.0 ～450.0μg。

酸枣仁总黄酮标准曲线

精密量取芦丁对照品溶液0，0.1，0.2，0.4，0.6，0.8 mL分别置25 mL量瓶中，按“1”项下“加入浓度为0.2 moL· L^-1的三氯化铝溶液”操作，在272 nm处测定吸光度，以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。得到回归方程为Y = 0.2255 X +0.0003，r = 0.9997，线性范围为0.76 ～6.08 μg

4提取工艺参数的优化

正交试验设计

在确定提取方法和提取溶剂的基础上，选取主要影响提取效率的因素：溶剂倍量(A)、提取时间(B)、提取次数(C)，每个因素选择3个水平，按L₉（3⁴）正交表安排实验（表2-1）。以溶液中总黄酮和总皂苷含量为考察指标，通过多指标综合评分法，全面分析，筛选最佳提取工艺参数。

Levels	Quant. of solvent	Extrn. Duration·h^-1	Extrn. time
1	6	1.0	1
2	8	1.5	2
3	10	2	3

Table 2-1. The factors and levels selected

正交试验结果

以酸枣仁中总皂苷和总黄酮含量为指标，进行多指标综合评分，评分时以各指标最大值为参照将数据进行归一化，给出不同的权重系数。因总皂苷和总黄酮是酸枣仁药材的主要活性成分，且两因素对综合评分的数值贡献相同，故将总皂苷和总黄酮权重系数各定为0.5。

综合评分（Y）=0.5 ×（总皂苷含量/最大值）× 100 + 0.5 × (总黄酮含量/最大值) × 100。以综合值进行统计分析，直观分析见表2-2，方差分析见表2-3。

由直观分析结果（表2-2）和方差分析结果（表2-3）可见，以综合评分为标准，在所选因素水平范围内，影响其提取效率各因素的主次关系为：C＞A＞B，即提取次数对提取过程有显著影响，溶剂倍量影响较小，提取时间影响最小。故最佳提取工艺为A₂B₃C₃，即8倍量70%乙醇提取3次,每次2 h。

Table 2-2. Resultof L₉(3⁴)orthogonal test

NO.

total saponins content (mg·g^-1)

total flavonoids content (mg·g^-1)

grading method