主题:【第十五届原创】动植物膜脂和膜蛋白提取方法

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动植物膜脂和膜蛋白提取方法

大豆卵磷脂和肺腺癌细胞膜脂提取物的制备



对于大豆卵磷脂样品,首先去除胶囊,将100 mg大豆卵磷脂样品用10 mL正己烷/异丙醇(1:1,v/v)稀释溶解,样品在4℃下超声10 min,样品再经0.45 μm微孔膜过滤,以备后续使用。

肺腺癌细胞膜脂的提取方法参照Folch法。首先裂解肺腺癌细胞,向细胞液中加入18 mL已经配好的氯仿-甲醇(2:1,v/v)混合溶剂,摇匀后置于高速低温离心机4℃,3000 r/min离心10 min(摇匀过程中时刻注意溶液的温度,尽量避免温度过高)。然后向该体系中加入约2 mL的超纯水,摇匀后离心。上清液移除后用少量的甲醇-水(1:1,v/v)小心清洗上表面,得到肺腺癌磷脂提取物,过0.45 μm滤膜后,N2吹干,备用。冰箱-20℃保存,临用时现配溶液。

肝脏膜蛋白质的制备



参考试剂盒提取小鼠肝脏膜蛋白质的步骤如下:,

试剂准备和组织预处理:取148 mg小鼠肝脏组织,用手术剪刀剪碎,移入4 mL离心管中,加入1 mL的膜蛋白提取剂A,冰浴15 min,之后将离心管中液体移入冰浴预冷玻璃匀浆器中,匀浆70次。

去除未破碎的细胞:在4℃下将样品于900 g离心10 min,为了确保上清液的纯度应尽量避免接触沉淀。

收集肝脏浆蛋白和细胞膜碎片:将上清液继续在4℃下1400 g离心40 min,获得细胞膜碎片。上清液(肝脏浆蛋白)应置于-70℃下保存备用。

提取肝脏膜蛋白质:尽量将上一步骤中上清液吸取干净,避免肝脏浆蛋白的干扰。加入300 μL膜蛋白提取剂B,高速涡旋10 s后立即进行冰浴10 min,重复上述步骤三次。随后立即4℃下14,000 g离心15 min,吸取上清肝脏膜蛋白溶液,-70℃下保存备用。
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