主题：【第十五届原创】MSI1 在人小细胞肺癌细胞系中的表达及 MSI1 低表达细胞模型的构建

MSI1 在人小细胞肺癌细胞系中的表达及 MSI1 低表达细胞模型的构建

MSI1 在人小细胞肺癌细胞系中高表达

提取人正常肺上皮细胞 BEAS-2B，SCLC-A 型 H69、H209、DMS153 细胞，SCLC-N 型 H446、H82、H2066 细胞，SCLC-P 型 H526、H211 细胞，SCLC-Y 型 H841、DMS114、

SW1271 细胞的 RNA，利用 q-PCR 检测 MSI1 在正常肺上皮及小细胞肺癌细胞系中的表达情况，结果如图 2-1 显示，MSI1 在小细胞肺癌细胞系中的表达远远高于正常肺上皮细胞，综合分析，选取了 H69、H82、H526 及 SW1271 细胞用于后续实验。

图    小细胞肺癌细胞系中 MSI1 mRNA 的表达（***P<0.001）

MSI1 低表达细胞模型的构建

本实验选取人小细胞肺癌细胞系 H69、H82、H526、SW1271 细胞，使用慢病毒感染技术敲低 MSI1 的表达，同时设置对照组除外病毒本身对细胞产生的影响，待细胞状态良好使用嘌呤霉素筛选， 然后在荧光显微镜下观察如图  ， 可见 H69-NC 、H69-shMSI1-1、H69-shMSI1-2、H82-NC、H82-shMSI1-1、H82-shMSI1-2、H526-NC、H526-shMSI1-1、H526-shMSI1-2、SW1271-NC、SW1271-shMSI1-1、SW1271-shMSI1-2

细胞均产生绿色荧光，表明人小细胞肺癌细胞慢病毒感染成功。

图    慢病毒感染后 4X 荧光显微镜下图片（H69、H82、H526、SW1271 明场及荧光照片）

    敲低 MSI1 后转录和蛋白水平验证

分别提取对数生长期的 H69-NC 、H69-shMSI1-1 、H69-shMSI1-2 、H82-NC 、

H82-shMSI1-1、H82-shMSI1-2、H526-NC、H526-shMSI1-1、H526-shMSI1-2、SW1271-NC、

SW1271-shMSI1-1、SW1271-shMSI1-2 细胞的 RNA 和蛋白，利用 q-PCR 技术分别检测各细胞 MSI1 mRNA  相对表达量，结果如图  所示，与对照组相比，H69-shMSI1-1、 H69-shMSI1-2 、 H82-shMSI1-1 、 H82-shMSI1-2 、 H526-shMSI1-1 、 H526-shMSI1-2 、

SW1271-shMSI1-1、SW1271-shMSI1-2 组 MSI1 mRNA 表达量明显降低（P<0.01）， 抑制率约为 75%。利用 Western blot 技术检测各细胞内 MSI1 蛋白的表达情况。结果如图 2-3  所示，与对照组相比，MSI1  蛋白表达在 H69-shMSI1-1、H69-shMSI1-2、

H82-shMSI1-1、H82-shMSI1-2、H526-shMSI1-1、H526-shMSI1-2、SW1271-shMSI1-1、

SW1271-shMSI1-2 细胞中明显降低。表明 MSI1 低表达细胞模型构建成功。

图    敲低 MSI1 在转录水平和蛋白水平的验证（***P<0.001）