敲低ODC1对DLBCL细胞增殖、周期、凋亡的影响

敲低ODC1对DLBCL细胞系增殖的影响

CCK-8是一种基于WST-8而广泛应用于细胞增殖和细胞毒性的快速、高灵敏度、无放射性的比色检测试剂盒。WST-8在电子耦合试剂存在的情况下，可以被线粒体内的一些脱氢酶还原生成橙黄色的甲瓒，生成的甲瓒物的数量与活细胞的数量呈正比，因此可以直接进行细胞增殖和毒性分析。

CCK-8法测生长曲线实验结果如图3-1显示，实验组Pfeiffer-shODC1细胞的OD值明显低于对照组。表明敲低ODC1抑制了DLBCL细胞的生长增殖。

图ODC1低表达对Pfeiffer对照组和实验组细胞增殖的抑制情况。应用 Graphpad prism5 作图所示（*P <0.05,**P <0.01,***P <0.001,表示与对照组相比，敲低组OD值减小具有统计学意义）。

敲低ODC1对DLBCL细胞系凋亡的影响

流式结果如图所示，与对照组相比，实验组Pfeiffer-shODC1的早期凋亡和晚期凋亡均显著增加。表明敲低ODC1促进了DLBCL细胞的凋亡。

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图 a 流式细胞术结果图 b 早期和晚期凋亡柱状图

敲低ODC1对DLBCL细胞系线粒体凋亡途径关键蛋白的影响

提取对数生长期的Pfeiffer对照组及实验组细胞总蛋白，利用Western blot 检测敲低ODC1对Pfeiffer细胞凋亡的影响，因此我们检测了 Caspase 信号通路相关蛋白 BCL-2，BAX，Cytochrome c，Caspase 3，cleaved Caspase 3，PARP，cleaved PARP。结果如图3-3所示，与对照组相比，实验组的抗凋亡蛋白 BCL-2 表达下调，促凋亡蛋白 BAX 显著上调， Cytochrome c，cleaved Caspase 3，cleaved PARP 显著上调，Caspase 3 的表达下调，PARP 无明显变化。这些结果表明，在DLBCL细胞中，敲低 ODC1 诱导Pfeiffer细胞凋亡，且诱导凋亡的的机制可能是激活了 Caspase 凋亡途径。

敲低ODC1对DLBCL细胞系周期的影响

提取对数生长期的Pfeiffer 对照组及实验组总蛋白，利用Western blot 检测敲低ODC1对Pfeiffer细胞周期的影响。结果如图显示，在细胞系Pfeiffer中，与对照组相比，实验组 Cyclin B1 表达上调，Cyclin A2的表达下调，说明敲低ODC1后，细胞阻滞于G2 /M期。