敲低 MSI1 对 SCLC 细胞系 EMT 的影响

提取对数生长期的 H69、H82、H526、SW1271 对照组及实验组细胞总蛋白，利用Western blot 检测E-cadherin、N-cadherin、Vimentin 的表达量。E-粘连蛋白（E-cadherin）表达下调是 EMT 的一个主要标志，削弱了上皮细胞之间的强大粘附力，使细胞流动性增强。N-钙粘蛋白（N-cadherin）、波形蛋白（Vimentin）上调，导致肿瘤细胞骨架重排，促进肿瘤的转移。

结果如图显示，与对照组相比，实验组 E-cadherin 表达量增加，而 N-cadherin、

Vimentin 表达量显著下降，证明 MSI1 低表达使小细胞肺癌细胞的 EMT 过程受到明显抑制。

图 EMT 相关蛋白在 H69、H82、H526、SW1271 对照组与实验组的表达情况

敲低 MSI1 对 SCLC 细胞系周期的影响

提取对数生长期的 H69、H82、H526、SW1271 对照组及实验组总蛋白，利用

Western blot 检测敲低 MSI1 对 SCLC 细胞周期的影响。

结果如图 4-2 显示，在细胞系 H69、H82 中，与对照组相比，实验组 Cyclin B1 表达上调，Cyclin A2 的表达下调，说明敲低 MSI1 后，细胞阻滞于 G2 /M 期。细胞系 H526 中，与对照组相比，实验组 Cyclin E1 表达上调，Cyclin A2 的表达下调，说明敲低 MSI1 后，细胞阻滞于 G1 /S 期。细胞系 SW1271 中，与对照组相比，实验组Cyclin D1 表达上调，Cyclin E1 表达下调，说明敲低 MSI1 后阻滞其于 G1 期。

图周期相关蛋白在 H69、H82、H526、SW1271 对照组与 MSI1 敲低组的表达情况

敲低 MSI1 对 SCLC 细胞系凋亡的影响

提取对数生长期的 H69、H82、H526、SW1271 对照组及实验组细胞总蛋白，利用Western blot 检测敲低 MSI1 对 SCLC 细胞凋亡的影响，因此我们检测了 Caspase 信号通路相关蛋白 BCL-2，BAX，Cytochrome c，Caspase 3，cleaved Caspase 3，PARP， cleaved PARP。结果如图 4-3 所示，与对照组相比，实验组的抗凋亡蛋白 BCL-2 表达下调，促凋亡蛋白 BAX 显著上调， Cytochrome c，cleaved Caspase 3，cleaved PARP 显著上调，Caspase 3 的表达下调，PARP 无明显变化。这些结果表明，在 SCLC 细胞中，敲低 MSI1 诱导 SCLC 细胞凋亡，且诱导凋亡的的机制可能是激活了 Caspase 凋亡途径。

图凋亡相关蛋白在 H69、H82、H526、SW1271 对照组与实验组的表达情况

4 敲低 MSI1 对 SCLC 细胞系 Wnt 信号通路的影响

MSI1 作为一种干细胞决定因素发挥作用，促进癌细胞存活、肿瘤进展，大量研究证实 MSI1 在肿瘤中发挥作用与 Wnt 信号通路密切相关，而 β-Catenin 是 Wnt 信号通路下游关键调控分子，细胞表面标记物 CD44、CD133 是肿瘤干细胞标志物，因此本研究检测在人 SCLC 细胞中 MSI1 敲低后 β-Catenin、CD44、CD133 的表达情况。

结果如图所示，与对照组相比，实验组的 CD44、CD133、β-Catenin 的表达量明显下调，敲低 MSI1 后在一定程度上抑制了 Wnt 信号通路，表明 MSI1 在人小细胞肺癌细胞中通过激活 Wnt 通路发挥作用。