主题:【已应助】如何使用液氮研磨组织?

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做代谢组学前处理,需要研磨动物组织,由于含有筋之类的东西,很难磨匀,看文献中有的是用液氮研磨,我想请教一下液氮研磨具体是怎么操作的?之前有试过,是将组织剪碎后放入研磨罐,然后把研磨罐放入液氮中5min后用研磨仪研磨,但是根本磨不动,我接下来想试一下把组织剪碎放入研钵中,然后倒入液氮手动研磨,可行吗?这样的话有一个问题就是直接把液氮倒到样本中会污染样本影响我后续的代谢物提取吗?
推荐答案:通标小菜鸟回复于2023/07/03
液氮研磨就是让样品在低温下冷冻,冷冻温度要达到很低,然后样品就会被冻的很脆,这种情况下再进行研磨就会容易一些。楼主你可以试着冷冻时间久一点,把温度降到极致
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通标小菜鸟
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液氮研磨就是让样品在低温下冷冻,冷冻温度要达到很低,然后样品就会被冻的很脆,这种情况下再进行研磨就会容易一些。楼主你可以试着冷冻时间久一点,把温度降到极致
123
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液氮研磨步骤:

  1、将研钵从烘箱内拿出,用专用容器盛一些液氮备用;

  2、将液氮小心加入并浸满研钵,浸泡预冷研杵与研钵(加入液氮时,缓慢加入,防止液氮飞溅);

  3、当第一次加入的液氮挥发*后,立即向研钵中缓慢加入约1/2研钵体积的液氮(若组织块较大或较多的情况下可浸满研钵),将组织迅速转移至液氮内,确保组织全部浸没在液氮中;

  4、使用研杵在液氮中轻轻敲打组织,将组织打碎成小块,要注意切勿用力过度,要防止组织块飞溅出研钵;在液氮即将挥发完时,使用研杵对组织样本进行碾压研磨(注意,若为植物样本可直接用研杵碾压组织);

  5、待液氮挥发完后,立即加入1/3研钵体积的液氮(注意,加入液氮速度要缓慢,切勿使得液氮冲击力过大,将组织样本冲出研钵),迅速用研杵研磨组织,根据组织状态的变化程度,在确保组织始终处于冰冻状态下,及时补充液氮进行研磨,(一般30s~1min补充一次,至少需要补充3次以上),直至组织被研磨成粉末状。

  6、当组织研磨成粉末状后立即加入合适体积的裂解液进行组织裂解,若裂解液冻于研钵内壁,用研杵轻轻敲击下来,继续研磨让组织粉末与裂解液充分混合,研磨成糊状后进行下一个样本的取样操作;

  7、静置至样本和裂解液混合物融化,将已经融化成液体状态的样本转移至离心管中,插入冰块上暂存。
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原文由 123(m3149125) 发表:
液氮研磨步骤:

  1、将研钵从烘箱内拿出,用专用容器盛一些液氮备用;

  2、将液氮小心加入并浸满研钵,浸泡预冷研杵与研钵(加入液氮时,缓慢加入,防止液氮飞溅);

  3、当第一次加入的液氮挥发*后,立即向研钵中缓慢加入约1/2研钵体积的液氮(若组织块较大或较多的情况下可浸满研钵),将组织迅速转移至液氮内,确保组织全部浸没在液氮中;

  4、使用研杵在液氮中轻轻敲打组织,将组织打碎成小块,要注意切勿用力过度,要防止组织块飞溅出研钵;在液氮即将挥发完时,使用研杵对组织样本进行碾压研磨(注意,若为植物样本可直接用研杵碾压组织);

  5、待液氮挥发完后,立即加入1/3研钵体积的液氮(注意,加入液氮速度要缓慢,切勿使得液氮冲击力过大,将组织样本冲出研钵),迅速用研杵研磨组织,根据组织状态的变化程度,在确保组织始终处于冰冻状态下,及时补充液氮进行研磨,(一般30s~1min补充一次,至少需要补充3次以上),直至组织被研磨成粉末状。

  6、当组织研磨成粉末状后立即加入合适体积的裂解液进行组织裂解,若裂解液冻于研钵内壁,用研杵轻轻敲击下来,继续研磨让组织粉末与裂解液充分混合,研磨成糊状后进行下一个样本的取样操作;

  7、静置至样本和裂解液混合物融化,将已经融化成液体状态的样本转移至离心管中,插入冰块上暂存。

这里的裂解液指的是什么呢?是我要用来提取代谢物的提取液吗?甲醇和水?
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原文由 通标小菜鸟(v3141805) 发表:
液氮研磨就是让样品在低温下冷冻,冷冻温度要达到很低,然后样品就会被冻的很脆,这种情况下再进行研磨就会容易一些。楼主你可以试着冷冻时间久一点,把温度降到极致
这样可以将样品研磨成干燥的粉末吗?研磨完成之后是不是直接取样加入提取液提取了?
Leuchi666
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代谢组学的话,也可以冷冻匀浆,样品体积越小越好,如果要研究不同部位的组织,可以先匀浆再取样
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原文由 Leuchi666(Ins_0bb5bacc) 发表:
代谢组学的话,也可以冷冻匀浆,样品体积越小越好,如果要研究不同部位的组织,可以先匀浆再取样
直接冷冻匀浆然后加提取液提取?这样会受样品中的水分影响吗?
Leuchi666
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原文由 Ins_e020ef66(Ins_e020ef66) 发表:
直接冷冻匀浆然后加提取液提取?这样会受样品中的水分影响吗?
直接提取就好了,提取溶剂里面不是也有水吗,提取完之后真空冷冻干燥,然后再复溶上机就好,如果定量的话,计算的也是每mg样品中(总重)有多少ug/ng/pg的某种代谢物。
Leuchi666
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原文由 Ins_e020ef66(Ins_e020ef66) 发表:
直接冷冻匀浆然后加提取液提取?这样会受样品中的水分影响吗?
研磨和匀浆的目的都是使样品组织破碎,方便释放代谢物,所以只要使样品颗粒尽量小,越小越好。
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