引言甲醛，化学分子式HCHO，分子量:30.03,是一种无色，有强烈刺激性气味的气体。易溶于水、醇醚。在常温下是气态，通常以水溶液和气态形式出现。甲醛为较高毒性的物质，在我国有毒化学品优先控制名单上高居第二位。已经被世界卫生组织确定为致癌和致畸形物质，是公认的变态反应源，也是潜在的强致突变物之一。因经济利益驱使，一些不法分子以甲醛为食品添加剂，如水发食品加甲醛以凝固蛋白防腐、改善外观、增加口感，酒类饮料中加入甲醛防止浑浊、增加透明度，为了让畜禽血制品保鲜，使用甲醛化学溶剂浸泡、猪、鸭血，由于血块中存在大量小孔，因此甲醛极易残留，在食用血制时无法有效洗净残留的甲醛，人体摄入的甲醛积蓄到一定浓度，将直接导致癌症。以上都会造成食品的严重污染，损害人体健康。《中华人民共和国食品卫生法》中已明文规定禁止甲醛作为食品添加剂。由此可见，甲醛污染问题已普及到生活中的每一个角落，严重威胁人体健康，应引起人们的高度关注。甲醛含量已成为当今居室、纺织品、食品中污染监测的一项重要安全指标。
我们做了畜禽血制品猪血、鸭血和面条，其中血制品中甲醛没方法，只有水产品中甲醛测定的行标，结合肉中亚硝酸盐氮的前处理方法来除去血中蛋白，并参照的产品中甲醛测定的反应原理来进行了测定。检测结果有几份样品超标，为不漏报一个又不错报一个的原则，又进行样品复查，同时又换新仪器Arc做，并把含量高的样品用化学法进行了对比验证，在确定结果可靠准确可信的情况下才进行网络直报。

1材料与方法

1.1方法原理甲醛在酸性条件下与2,4-二硝基苯肼溶液在60°C水浴中衍化生成二硝基苯腙经二氯甲烷反复提取分离后，经无水硫酸钠脱水，水浴蒸干，甲醇溶解残渣， ODS-C₁₈柱分离，测定甲醛含量。

1.2试剂

1.2.1超纯水

1.2.2二氯甲烷（美国默克公司优级纯）

1.2.3甲醇（美国默克公司色谱纯）

1.2.4盐酸（上海国药优级纯）

1.2.5无水硫酸钠（北京化工厂，分析纯）

1.2.6亚铁氰化钾（北京化工厂，分析纯）

1.2.7乙酸锌（北京化工厂，分析纯）

1.2.8 2,4-二硝基苯肼（上海试剂三厂，分析纯）

1.2.9甲醛储备溶液（1.04mg/ml，国家标准物质研究中心）。

1.3试剂配制

1.3.1 2,4-二硝基苯肼溶液（1000μg/ml）：称取100mg 2,4二硝基苯肼溶解于24ml浓盐酸中，加水定容至100ml。

1.3.2 亚铁氰化钾溶液 10.6%:称取 10.6g 亚铁氰化钾加水溶解定容至100mL。

1.3.3 乙酸锌溶液21.9%:称去乙酸锌21.9g,加水溶解并加入5.0mL冰乙酸,定容至100mL。

1.3.4 无水硫酸钠：经550℃高温烘烤，干燥器中贮存冷却后使用。

1.3.5 甲醛标准使用液：临用时稀释至20μg/ml。

1.4 仪器条件

色谱柱：ODS-C₁₈柱（4.6nm×250mm，5μm）；流动相：甲醇-水（60:40）流速：0.5mL/min；柱温：40℃；进样量：10μL；检测波长：338nm；检测器：二极管阵列检测器。

1.5标准系列的制备

甲醛标准溶液（10.0mg/ml，国家标准物质研究中心），高纯水稀释为1.0mg/ml储备液，再稀释为100.0μg/ml应用液，吸取100.0μg/ml应用液20、50、100、150、200μl定容至1ml，配制浓度为2、5、10、15、20μg/ml的标准系列，加入0.2ml衍生剂后，处理同下1.6样品衍生处理。

1.6 操作步骤

取切碎混匀的血块5g于50ml离心管中，加水至20ml，匀浆，加5ml亚铁氰化钾摇匀，再加5ml乙酸锌，定容至50ml，摇匀，6500r/min离心5分钟，取上清液1.0ml于15ml塑料离心管中，加入0.2ml 2,4-二硝基苯肼溶液，加盖60°C水浴中衍生15min,然后在流水中快速冷却，加入2ml二氯甲烷，漩涡振荡器萃取1min，3000r/min离心2min，取上清液再用2ml二氯甲烷萃取两次，合并三次萃取的下层黄色溶液，将萃取液用无水硫酸钠柱过滤脱水，60°C水浴蒸干或氮气吹干，放冷，残渣用甲醇溶解定容至1ml，经0.22μm滤膜过滤于进样瓶上机测定，同时做空白对照试验。

1.7 样品测定与结果计算

仪器在1.4条件下依次对标准系列，样品空白和样品溶液进行测定，标准系列以峰面积对质量浓度拟合曲线。样品以保留时间定性，峰面积定量，从标准曲线上计算浓度值，根据下式计算样品甲醛含量。

[img=,135,]file:///C:/Users/wsz29/AppData/Local/Temp/ksohtml3804/wps1.png[/img]

[img=,135,]file:///C:/Users/wsz29/AppData/Local/Temp/ksohtml3804/wps2.png[/img]

X-样品中的甲醛含量，mg/ kg；C-样品中甲醛曲线含量，μg/ml；C’-样品空白甲醛的曲线含量，μg/ml；V-样品定容体积，ml；50 -稀释倍数； m-样品称样量,g。

2结果与讨论

2.1前处理方法的选择考虑到畜禽血制品中蛋白质含量较高，蛋白质吸附甲醛，因此对甲醛测定会有影响，必须破坏蛋白，释放甲醛，我们分别加亚铁氰化钾、乙酸锌以沉淀蛋白。我们同时做两份样品，一份除蛋白得到结果高，另一份不除蛋白结果低，通过实验证明除蛋白很重要、很关键。

2.2 衍生注意事项衍生好后，一定等温度降下后再打开瓶盖，否则易挥发掉。衍生一定要做的稳定，标准应与样品同一批衍生好。

2.3方法的探索

2.3.1定性问题不加衍生剂标准不出峰，不加标准只加衍生剂也不出峰，证明不是衍生剂和未衍生过的甲醛出的峰，即可定性。

2.3.2 结果问题因有几份样品结果偏高，本着不漏报一个，以免危害人民健康的原则，必须慎之又慎，用化学法验证，因化学法检测限高，对于含量高的样品可以验证。对于结果可靠性问题，买了新甲醛标准溶液，换标液做，以排除标液问题，又换新液相Arc做，并咨询老师、同行，结果均得到了进一步确证，结果可靠、准确。

2.4 线性范围按照1.4测定条件对甲醛标准曲线进行测定，采用外标法定量，结果见表1。

表 1 线性回归和响应值

标液浓度μg/ml	4	8	12	16	20
响应值	183988	378164	570584	759909	948471
r = 0.9999 a = - 4990.1 b = 47767.8

2.5 检出限和定量限以定性离子通道中信噪比（S/N）为3时样品中甲醛的浓度为检出限为2 mg/ Kg，以定量离子通道中信噪比（S/N）为10时样品中甲醛的浓度为定量限为7mg/ Kg。

2.6 不同样品的测定面条：取样5g于50ml离心管中，加水至20ml，匀浆后定容至离心，再按血的方法加衍生剂做。同时做空白、平行、加标，加标：取0.6ml浓度为1.04 mg/ ml胡标液于样品管中。因面条含大量淀粉，离心后亦絮状团，可先塞棉花过一遍去除，再静置分层。而面条均未检出甲醛。

2.7 建议按照方法猪血该匀浆，但通过实验发现涡旋也可以振碎血块，多涡旋一会也可以成乳状，这样就减少了工作量，因为一次可涡旋24个，还避免了交叉污染的机会。可谓一举两得。

3 小结

甲醛的危害众所周知，甲醛能与蛋白结合。因此必须破坏蛋白，释放甲醛，我们分别加亚铁氰化钾、乙酸锌以沉淀蛋白，结果可满足监测需要。