主题：【资料】抗体纯化方法概览：四种策略及其优缺点详解

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发表于：2023/10/17 14:55:28 楼主管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

抗体是一类免疫蛋白，可识别并结合特定抗原，在生物研究以及临床应用中，纯化得到高质量的抗体十分重要。

? 凝胶过滤层析法

凝胶过滤层析法的原理是基于抗体分子的不同大小，利用不同孔径的凝胶过滤介质将目标分子（抗体）与较大分子（如蛋白质等杂质）分离开来。

具体操作步骤如下：

1. 将含有目标抗体的混合物加入到预先平衡好的凝胶柱中。

2. 使用缓冲液进行洗脱，较大分子无法通过凝胶柱而流出。

3. 目标抗体分子大小适中，可通过凝胶柱并被保留下来。

4. 最后使用洗脱缓冲液将目标抗体从凝胶柱中洗脱出来，得到纯化的抗体。

? 亲和层析法

亲和层析法的原理是利用抗体分子与抗原之间的特异性结合来实现目标抗体的纯化。

具体操作步骤如下：

1. 将含有目标抗体的混合物加入到预先包含特异性结合配体(如蛋白A、蛋白G等)的亲和层析柱中。

2. 目标抗体与配体之间发生特异性结合。

3. 使用洗脱缓冲液将非特异结合的组分洗脱掉。

4. 最后使用洗脱缓冲液将目标抗体从亲和层析柱中洗脱出来，得到纯化的抗体。

? 离子交换层析法

离子交换层析法的原理是利用目标抗体分子与离子交换柱中固定的离子之间的相互作用来实现纯化。

具体操作步骤如下：

1. 将含有目标抗体的混合物加入到预先平衡好的离子交换柱中。

2. 使用缓冲液进行洗脱，使与固定离子相同电荷的分子无法通过离子交换柱而流出。

3. 目标抗体由于表面电荷不同，能够通过离子交换柱被保留下来。

4. 最后使用洗脱缓冲液改变pH或盐浓度等条件，将目标抗体从离子交换柱中洗脱出来，得到纯化的抗体。

? 逆向相色谱法

逆向相色谱法的原理是利用目标抗体分子与逆向相色谱柱中固定的疏水基团之间的相互作用来实现纯化。

具体操作步骤如下：

1. 将含有目标抗体的混合物加入到预先平衡好的逆向相色谱柱中。

2. 使用缓冲液进行洗脱，使疏水性较低的分子无法通过逆向相色谱柱而流出。

3. 目标抗体由于表面疏水性不同，能够通过逆向相色谱柱被保留下来。

4. 最后使用洗脱缓冲液改变溶剂极性等条件，将目标抗体从逆向相色谱柱中洗脱出来，得到纯化的抗体。

抗体纯化方法的优缺点

凝胶过滤层析法：
优点：简单易行，不需要特殊设备，适用于各种规模的实验室
缺点：分离效率低，只能实现较为粗略的纯化

亲和层析法

优点：纯度高，效率高
缺点：需要特定的亲和试剂和配体，成本较高

离子交换层析法

优点：选择性高，适用性强
缺点：需要根据不同抗体进行条件优化，操作较复杂

逆向相色谱法

优点：选择性高，灵活性强
缺点：需要特定设备支持，操作条件较为复杂

抗体纯化是一项关键技术，在抗体制备过程中十分重要。每种方法都有其特点和适用性，义翘神州可根据您的具体需求选择合适的抗体纯化方法，保证交付高质量、高纯度的纯化抗体。

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