主题:【第十六届原创】检测实验室中高效液相色谱仪的日常维护及应用

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      高效液相色谱仪通常由高压输液泵、自动进样器、色谱柱、检测器组成。高效液相色谱仪采用微粒多孔为固定相,填装在口径小且短的不锈钢柱内,流动相(极性不同的单一溶剂、比例 / 体积不同的混合溶剂、缓冲液等)通过高压输液泵进入高柱压的色谱柱,大大加快溶质在固定相的扩散速度,可达到分析时间短、柱效高、高效分离能力的效果,分离后的溶质进入检测器,最终实现对样品的分析检测。


1.制备流动相的要点

在高效液相色谱仪分析检测的过程中,溶剂瓶应处于密闭的状态,防止溶剂蒸发引起流动相组分的改变。流动相在使用前,必须经过脱气处理,达到去除溶解在溶剂中的气体的效果,同时可避免流动相从色谱柱流到检测器时因为压力下降而产生气泡。气泡会增加基线噪音,使仪器分析灵敏度下降,甚至无法分析。另外,溶解在流动相中的氧气是很好的荧光猝灭剂,如果使用 FLD(荧光检测器)检测,可能会造成荧光猝灭,被分析样品中某些成分被氧化,从而影响FLD 的检测效果。实验室中常用的脱气方法有吹氦脱气法、加热回流法、抽真空脱气法、超声脱气法以及在线真空脱气法。相较而言,吹氦脱气法的效果明显但成本高;加热回流法效果较好,但操作复杂,且有气体挥发现象造成污染;抽真空脱气法易抽走流动相中的有机相;超声脱气法是将流动相用超声振荡 10 15 min,简便易行,但效果差;在线真空脱气技术结合膜过滤器和真空脱气装置,可使流动相在进入输液泵前连续真空脱气,因此在线真空脱气技术效果最好,并且适用于多组分溶剂
2. 高压输液泵的维护
高压输液泵可以给色谱柱提供压力稳定、流量准确的流动相,流动相的压力若不稳定,则会导致基线噪声大、基线不平,影响检测结果。及时合理的维护能延长色谱仪的使用寿命,因此高压输液泵的维护使用的流动相必须是 HPLC级别,并要经过脱气、过滤处理,还要及时更换 Purge 阀里的过滤芯,防止压力过大,检测结束后,要及时冲洗泵中的缓冲液,防止盐分沉积后导致泵出现阻塞。
3. 开关机注意事项
技术人员在确认环境满足仪器的使用要求(温度 20 30 ?,湿度 60% 80%),依次打开电源稳压器、高压输液泵、检测器,待仪器自检完成无异常情况后,打开电脑,开启操作平台软件。关机顺序与开机顺序相反。
4.开展期间核查
期间核查的方法:
仪器设备在两次检定或校准期间必须进行期间核查,保证检测性能处于可控状态。期间核查的方式包括仪器间的比对、方法间的比对、运用稳定性好的样品重复核查、对标准物质进行验收以及单点自校,检验检测机构可根据自身实验室条件进行灵活选择。

期间核查的一般流程为:①制定设备期间核查程序;②制备详细的期间核查计划;③制定高效液相色谱仪的期间核查作业指导书;④技术人员根据期间核查计划和作业指导书实施核查,并保留核查记录;⑤出具核查报告;⑥对核查的全过程进行实施效果评价。实验室可在期间核查中定性测量重复性相对标准偏差(RSD)、重复性相对标准偏差(RSD)以及回收率指标,观察是否满足仪器设备在实验室的要求。

    高效液相色谱仪在食品检测行业应用广泛,实现了对营养成分、食品添加剂、农兽药残留等的分析检测,提高了实验室的检测效率,保障了人们的饮食安全。实验室技术人员需高度重视高效液相色谱仪的维护以及期间核查工作,做好科学合理的日常维护,延长仪器设备的使用寿命,也为检测结果的准确性和有效性提供养成分、食品添加剂、农兽药残留等的分析检测,提高了实验室的检测效率,保障了人们的饮食安全。实验室技术人员需高度重视高效液相色谱仪的维护以及期间核查工作,做好科学合理的日常维护,延长仪器设备的使用寿命,也为检测结果的准确性和有效性提供保障。
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