主题:【求助】如何解决出现负峰的问题?

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Ins_4818853f
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小白第一次使用液相
目前使用的液相方法出现产物峰前出现一个负峰和另一个峰,产物峰后出现负峰的问题我该如何改进我的液相方法,最大程度避免此种情况干扰?
液相方法:乙腈/0.1%TFA水溶液(pH 2.12);流速0.9 mL/min;柱温40℃;检测波长:280nM(底物峰;黑色;16min)/210nM(产物峰;粉色;3.7min)
进样为含100 mM 磷酸钾盐缓冲液的酶催化反应,pH 8.0左右。待分离物质底物HMF,产物呋喃二甲胺DAF。

目前方法为文献中得来,是不是我应该改变流动相的组成,将0.1%TFA水溶液变成磷酸盐之类的以降低流动相的吸收避免负峰,或者提高低检测波长210nM的波长。
图二为文献中不同波长下HMF、DAF的吸光度。
希望大家能够提供几点建议,不胜感激!
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hnteng
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  你把最关键的信息没写出来。流动相乙腈:缓冲液的比例是多少?这个明显是你要检测的物质极性较大,很快跟出来了,跟溶剂峰一起了。你得大大降低乙腈的比例。
另外,能不用缓冲盐就不要用,对柱子、泵都有损伤。建议加点0.1-0.2%醋酸就行了。不要用磷酸缓冲液。
xiaolanzi5
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呋喃二甲胺在0.1%TFA流动相下出峰更早。这个流动相不合适。
sdzb1982
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可能溶剂效应,建议你用流动相溶解稀释样品试试。
Ins_4818853f
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原文由 hnteng(hnteng) 发表:
  你把最关键的信息没写出来。流动相乙腈:缓冲液的比例是多少?这个明显是你要检测的物质极性较大,很快跟出来了,跟溶剂峰一起了。你得大大降低乙腈的比例。
另外,能不用缓冲盐就不要用,对柱子、泵都有损伤。建议加点0.1-0.2%醋酸就行了。不要用磷酸缓冲液。
不好意思,乙腈:0.1% TFA为2%:98%,感觉应该不太能降低乙腈比例了?
hnteng
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原文由 Ins_4818853f(Ins_4818853f) 发表:
不好意思,乙腈:0.1% TFA为2%:98%,感觉应该不太能降低乙腈比例了?
    应该检测的是一种极性很大的物质。你得说是什么物质,不然别人怎么帮你?看看换成甲醇作有机相行不行?
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