1. 菌种活化将保藏菌接种在PDA斜面培养基试管中,培养7d~14d,使生成大量孢子。未制备孢子悬液时,不得拔去棉塞。每打开1支只供制备1次悬液,每次制备孢子悬液必须使用新培养的霉菌孢子。
2. 孢子悬液制备在上述PDA斜面培养基中加入少量无菌蒸馏水,用无菌接种环轻轻刮取表面的新鲜霉菌孢子,将孢子悬液置于250mL锥形瓶内,然后注入40mL洗脱液。
锥形瓶中加入直径5mm的玻璃珠10粒~15粒与孢子混合,具塞后置水浴振荡器中不断振荡使成团的孢子散开,然后用单层棉纱布过滤以除去菌丝。将其装入灭菌离心管中,用离心机分离沉淀孢子,去上清液。再加入40mL洗脱液,重复离心操作3次。制成浓度为(0.8~1.2)×106spores/mL的霉菌孢子悬液。若需要精确计数,则可以用改良察氏液体培养基稀释孢子悬液,用血球计数板计数。孢子悬液应在当天使用,若不在当天使用应在 3℃~7℃保存,并尽量在4d内使用。