硝基咪唑类药物是一类具有5-硝基咪唑环结构的抗菌和抗原虫药物，主要用于防治动物的滴虫病及厌氧菌感染等畜禽养殖领域。由于该类药物具有潜在的致癌、致畸、致突变作用和遗传毒性，其残留会对食品安全构成严重威胁，因此我国在《GB 31650-2019食品中兽药残留最大限量》中规定地美硝唑、甲硝唑仅允许作治疗用，但不得在动物性食品中检出。目前该类药物的检测方法主要是液相色谱-串联质谱法和高高效液相色谱法，现将国内相关主要检测标准总结如下：

序号	标准名称	检测原理	药物数量、种类
1	GB 31658.23-2022 食品安全国家标准动物性食品中硝基咪唑类药物残留量的测定液相色谱-串联质谱法	试样用乙酸乙酯提取，正己烷液液萃取除脂，混合型强阳离子交换反相固相萃取小柱净化，液相色谱-串联质谱测定，基质匹配内标法定量。	4种：甲硝唑、羟基甲硝唑、地美硝唑和羟基地美硝唑
2	GB/T 21318-2007 动物源食品中硝基咪唑残留量检验方法	样品用甲醇-丙酮均质或超声波提取，经乙酸乙酯液液分配，以凝胶色谱（GPC）净化，再经C₁₈固相萃取小柱净化，液相色谱-串联质谱测定，外标法定量。	10种：4-硝基咪唑、异丙硝唑、2-甲硝咪唑、洛硝哒唑、甲硝唑、氯甲硝咪唑、地美硝唑、苯硝咪唑、羟基甲硝唑、羟甲基甲硝咪唑
3	GB/T 23410-2009 蜂蜜中硝基咪唑类药物及其代谢物残留量的测定液相色谱-质谱/质谱法	试样用乙酸乙酯提取，蒸干提取液，甲醇-水定容，利用液相色谱-串联质谱仪测定，内标法定量。	7种：甲硝唑、1-（2-羟乙基）-2-羟甲基-5-硝基咪唑、二甲硝咪唑、2-羟甲基-1-甲基-5-硝基咪唑、异丙硝唑、2-（2-羟异丙基）-1-甲基-5-硝基咪唑、洛硝哒唑
4	农业部2349号公告-6-2015 饲料中硝基咪唑类、硝基呋喃类和喹啉类药物的测定液相色谱串联质谱法	样品用甲醇+乙腈+水（3+3+4）提取，吹干后用0.1 mol/L磷酸氢二钠溶解，HLB固相萃取柱净化，液相色谱-串联质谱法测定，外标法定量。	8种：异丙硝唑、甲硝唑、替硝唑、塞克硝唑、卡硝唑、奥硝唑、地美硝唑、罗硝唑
5	农业部1025号公告-22-2008 动物源食品中4种硝基咪唑残留检测液相色谱-串联质谱法	试样用乙酸乙酯振荡提取，正己烷除脂，MCX固相萃取小柱净化，液相色谱-串联质谱检测，外标法定量。	4种：洛硝哒唑、甲硝唑、二甲硝唑、2-羟甲基-1-甲基-5-硝基咪唑
6	GB/T 23407-2009 蜂王浆中硝基咪唑类药物及其代谢物残留量的测定液相色谱-质谱/质谱法	试样用0.25 mol/L氢氧化钠溶液溶解，乙酸乙酯液液萃取，阳离子交换固相萃取小柱净化，液相色谱-串联质谱仪测定，内标法定量。	5种：甲硝唑、二甲硝咪唑、2-羟甲基-1-甲基-5-硝基咪唑、异丙硝唑、2-（2-羟异丙基）-1-甲基-5-硝基咪唑
7	GB/T 21995-2008 饲料中硝基咪唑类药物的测定液相色谱-串联质谱法	试样用乙酸乙酯提取，浓缩至近干后溶解于0.1 mol/L磷酸中，正己烷液液分配，MCX固相萃取小柱净化，高效液相色谱-紫外检测器测定，外标法定量。	4种：甲硝唑、洛硝哒唑、二甲硝唑、替硝唑
8	GB/T 22949-2008 蜂王浆及冻干粉中硝基咪唑类药物残留量的测定液相色谱-串联质谱法	样品用0.1 mol/L乙酸钠缓冲溶液溶解，乙酸乙酯液液萃取，旋转蒸干后加入四氯化碳和0.1%甲酸水溶液，离心后取上层溶液，运用液相色谱串联三重四极杆质谱仪检测，外标法定量。	9 种：甲硝唑、地美硝唑、替硝唑、洛硝唑、特尼哒唑、异丙硝唑，以及羟基化甲硝唑、羟基化异丙硝唑、2-羟甲基-1-甲基化-5-硝咪唑
9	GB/T 23406-2009 肠衣中硝基咪唑类药物及其代谢物残留量的测定液相色谱-质谱/质谱法	试样用乙酸乙酯提取，蒸干后用甲醇-水定容，液相色谱-串联质谱仪测定，内标法定量。	7种：甲硝唑、1-（2-羟乙基）-2-羟甲基-5-硝基咪唑、二甲硝咪唑、2-羟甲基-1-甲基-5-硝基咪唑、异丙硝唑、2-（2-羟异丙基）-1-甲基-5-硝基咪唑、洛硝哒唑
10	农业农村部公告第197号-1-2019 饲料中硝基咪唑类药物的测定液相色谱-质谱法	试样经磷酸氢二钠缓冲溶液提取，HLB固相萃取小柱净化，液相色谱-串联质谱仪测定，基质匹配标准曲线校准，外标法定量。	4种：甲硝唑、洛硝哒唑、二甲硝唑、替硝唑
11	SN/T 1928-2007 进出口动物源性食品中硝基咪唑残留量检测方法液相色谱-质谱/质谱法	试样用甲醇+丙酮（3=1）均质或超声波提取，乙酸乙酯液液分配，凝胶色谱柱净化，再用C₁₈固相萃取小柱净化，液相色谱-串联质谱仪测定和确证，外标法定量。	4-硝基咪唑、异丙硝唑、二甲硝咪唑、洛硝哒唑、甲硝唑、氯甲硝咪唑、地美硝唑、苯硝咪唑、1-（2-羟乙基）-2-羟甲基-5-硝基咪唑、2-羟甲基-1-甲基-5-硝基咪唑

硝基咪唑类药物见光、遇热不稳定易分解，整个试验过程要求尽量在避光、相对较低温度下快速完成；该类药物呈弱碱性，在酸性环境中呈离子状态易溶于水，碱性环境中呈分子状态易溶于有机溶剂，因此上述标准对该类药物提取方式主要分为两大类：一是先用乙酸钠、氢氧化钠等碱性溶液溶解试样（可以先破坏样品中蛋白等基质），再用乙酸乙酯等不与水互溶的有机溶剂提取目标组分；二是直接用乙酸乙酯等有机试剂提取（乙腈相对于乙酸乙酯会提取动物组织中更多的极性基质，同时乙酸乙酯沸点较低，提取液在较低温度下也能蒸干，因此标准中大多选用乙酸乙酯作为有机提取试剂）。