主题:【原创】标准样放置的位置不同,对检测结果有影响么?

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闲鹤野云
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如果样品较多,从开始到加样结束可能超过30分钟,这样一来先把标准样放好反应与最后把标准样反应,对ELISA结果会有很大影响么?
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闲鹤野云
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在研究中发现,使用酶标仪进行测定时,由于加样时间不同,标准的吸光度有所不同.如何能保证较相似的标准曲线?减少测试样品量么?
闲鹤野云
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造成的差异原因是否与反应时间不同,温度在不同时间的变化有关?
闲鹤野云
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减少样品转移时差造成的结果误差,可以使用空白板井(新的或用后用稀盐酸清洗干净的老板井(非同类检测用的)),先把样品转移到相应板井内(250-300微升),然后用八道枪在吸取相应的体积到新检测板井中.这样一来,转移时间差异会大大减少.
marshallmijb
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原文由 ruojun 发表:
造成的差异原因是否与反应时间不同,温度在不同时间的变化有关?



    造成差异的原因很多,我觉得最主要的原因还是最终显色剂加入时间有差异,最明显的情况就是用单道枪从头加到尾,常常出现加到最后,前面的孔已经显色了的现象。

  至于加样的先后影响应该不大,只要反应时间足够(一般有效的抗原抗体反应为30-120分钟即可完成),反应达到平衡后不至于影响最终显色。

    而温度的影响据大牛们的研究表明也是有影响的,如边缘的孔和中间孔之间的边缘效应等,都是酶免反应中常出现的现象,这个比较难克服。

闲鹤野云
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原文由 marshallmijb 发表:
原文由 ruojun 发表:
造成的差异原因是否与反应时间不同,温度在不同时间的变化有关?



    造成差异的原因很多,我觉得最主要的原因还是最终显色剂加入时间有差异,最明显的情况就是用单道枪从头加到尾,常常出现加到最后,前面的孔已经显色了的现象。

  至于加样的先后影响应该不大,只要反应时间足够(一般有效的抗原抗体反应为30-120分钟即可完成),反应达到平衡后不至于影响最终显色。

    而温度的影响据大牛们的研究表明也是有影响的,如边缘的孔和中间孔之间的边缘效应等,都是酶免反应中常出现的现象,这个比较难克服。


谢谢了.单道枪加入样品,然后单道枪加入酶标记物,反应后八道枪加入显色底物和终止液,导致最后的板孔读数偏低,我感觉与样品间前后反应时间差异大有关.
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