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气质联用（GCMS）

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主题：克伦特罗前处理步骤的意义

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jcw2016

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发表于：2006/04/07 12:53:00 楼主管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

做了克伦特罗一段时间，但总也做不好。把步骤写出来，希望得到大家指点，告诉我每一步的意义。现以猪肝样为例。

称样10克——加入20毫升0.1M高氯酸均质——超声20Min——水浴30Min－－离心取上清夜——残渣中再加入5毫升0.1M高氯酸，离心——合并两次上清夜——调pH值9.4～9.6——离心——上清夜中加入8克氯化钠，25毫升异丙醇+乙酸乙酯（40+60），振荡20Min——取上清夜——残渣中加入20毫升异丙醇+乙酸乙酯（40+60），振荡20Min——合并两次上清液，旋转蒸发——于蒸干的样品中加入5毫升磷酸二氢钠，即得到提取液——净化

净化步骤如下：

使用的柱子为LC-WCX，3毫升柱子

10ML乙醇—3ML水－3ML磷酸二氢钠－3ML水（泵抽）

加入提取液（停泵）

加入1ML水－4ML乙醇（泵抽）

加入6ML乙醇+氨水（98+2）（停泵），得到收集液。

吹干收集液——加入500UL甲醇+50UL美托洛尔——吹干——加入BSTFA衍生化（75度，90Min）——吹干——加入甲苯定容——上GC-MS。

前处理过程就这些，希望有经验的大虾能告诉我每一步的意义。不慎感激！

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2006/4/7 14:18:00 沙发管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

没做过液相,但帮你分析分析:
称样10克——加入20毫升0.1M高氯酸均质——超声20Min——水浴30Min(此步可能是酸解)
－－离心取上清夜——残渣中再加入5毫升0.1M高氯酸，离心——合并两次上清夜——调pH值9.4～9.6——(此步骤可能是恢复原体形式)
离心——上清夜中加入8克氯化钠，(不明)
25毫升异丙醇+乙酸乙酯（40+60），振荡20Min——取上清夜——残渣中加入20毫升异丙醇+乙酸乙酯（40+60），振荡20Min——合并两次上清液，(提取)
旋转蒸发——于蒸干的样品中加入5毫升磷酸二氢钠，即得到提取液—(此处没说明白,5毫升磷酸二氢钠可能是缓冲溶液)

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jcw2016

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2006/4/7 15:28:00 板凳管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

谢谢你，守望云烟！没错，磷酸二氢钠就是缓冲液。可是为什么要缓冲呢？另外，我想补充一句，我是做气质的，不是液相。

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守望云烟

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2006/4/7 18:46:00 马扎管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

我也很奇怪，操作很象是液相进样啊，除非你做的东西是极性大的，用缓冲溶液溶解，然后分析，那用的色谱柱是WAX柱子吗？

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mouse_ly

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2006/4/8 23:32:00 地毯管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

楼主试试不用衍生化吧，我直接进样质谱是能检测出的，碎片好像是86.262，多一步操作数据总会差点

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yjs2

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2006/4/12 15:34:00 地板管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

原文由 mouse_ly 发表:
楼主试试不用衍生化吧，我直接进样质谱是能检测出的，碎片好像是86.262，多一步操作数据总会差点

别闹了,不衍生绝对不行的

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iluvm

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2006/4/12 22:47:00 6楼管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

克伦特罗是一种胺，偏碱性，高氯酸和克伦特罗结合，提取效率高。
调节pH偏碱可以游离出中性克伦特罗。
在萃取之前加入NaCl，也就是所谓盐析，可以提高水相极性，有利于萃取。
加入磷酸二氢钠使克伦特罗呈离子状态，然后用弱阳离子交换柱固相萃取。
10ML乙醇—3ML水－3ML磷酸二氢钠－3ML水（泵抽）。是预淋洗
加入1ML水－4ML乙醇（泵抽）。是淋洗
加入6ML乙醇+氨水（98+2）（停泵），得到收集液。是洗脱。（因为NH4+离子强度大于克伦特罗的铵盐，所以可以洗脱下来）

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