原文由 weiz 发表:
一种含有苯胺基团和氮杂环结构的化合物,在HPLC测定纯度时存在一些疑问,希望行家能给予一些指教:
这种化合物如果用甲醇/水:70/30流动相测定,纯度为94%(90/10也可,但保留时间太短);而如果用甲醇/水:90/10,用磷酸和氨水调节pH值到3.1左右作为流动相,测定的纯度变为60%左右。测了一下这个化合物的甲醇/水溶液的pH值为6.7左右,个人认为在这种情况下前一种方法更为准确,因为后一种方法会导致样品的不完全质子化,产生多峰。
以上是实验现象和个人的想法,不知道是否正确,现在正对采用哪种方法非常的困惑,希望得到经验丰富人士的意见,谢谢。
个人觉得此化合物在酸性下,做的比较准。虽然化合物呈弱碱性,但在酸性条件会酸化,对于搂主说的不完全质子化,可能性不大。进入色谱柱样品是非常少的。如果对此方法没有十分把握,可以去做个核磁,90% 与60%在核磁上是十分明显的。
如果楼主的HPLC有DAD检测器,你可以做个全波段的扫描。看看这两个峰的三维吸收的峰形如何。
也可以用DAD监测器软件中检测90%那个峰的纯度。如果这峰的各点的全波段的紫外吸收峰形中有不同的峰形,那说明此峰n没有分离。