原文由 ll7509 发表:
请问用SDS-PAGE测量蛋白质复合物分子量,在样品处理时是否一定要加热呢?
加热会使蛋白质变性,改变复合物的性质,影响结果的。
SDS-PAGE原理:
蛋白质在聚丙烯酰胺凝胶中电泳时,它的迁移取决于它所带电荷以及分子大小和形状等因素。如果在聚丙烯酰胺系统中加入阴离子去污剂十二烷基磺酸钠(SDS),大多数蛋白质能与SDS按一定比例结合,即每克蛋白质结合1.4g的SDS-复合物都带上相同密度的负电荷,它的量大大超过了蛋白质分子原有的电荷量,因而消除了蛋白质原有的电荷差别,使蛋白质分子电泳的迁移率主要取决于本身的分子量,而与蛋白质所带的电荷无关,在一定条件下,蛋白质的分子量的对数与电泳迁移率间呈负相关。
加热会使蛋白质变性,肯定会改变复合物的性质,只要不是改变分子量/表观分子量,就不会影响结果。