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主题：【求助】动物饲料制品酶力肽中不同分子量的蛋白质如何大致分析其含量，电泳仪可以么

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闲鹤野云
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发表于：2007/09/20 23:30:00 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
诸位专家，我的学生在使用一种动物副产品生产的原料，商品名为酶力肽，他们想研究不同分子量大小的小肽、寡肽和多肽的含量，什么方法比较简便。现在用分子筛的方法，比较耗时、费用高，电泳仪可以么？请多指教。
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menghandna
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2007/9/21 16:20:00 沙发 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
理论上是可以的，但由于受到染色条件，电泳分辨率等影响，只能得到大概的比例关系。另外，还与样品中各小肽等的具体分子大小有关系，需要选择合适的胶和浓度。
该帖子作者被版主 ruojun加 5积分， 2经验，加分理由：热心应助，技术水平高。
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闲鹤野云
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2007/9/25 1:31:00 板凳 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 menghandna 发表:
理论上是可以的，但由于受到染色条件，电泳分辨率等影响，只能得到大概的比例关系。另外，还与样品中各小肽等的具体分子大小有关系，需要选择合适的胶和浓度。


那样品如何处理,多指点.谢谢!
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闲鹤野云
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2008/3/14 19:07:32 马扎 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
能推荐一款价格适中性能不错的电泳仪么？蛋白质版主在哪里？
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2008/3/15 12:31:51 地毯 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
这个要根据实验需要来选择，没有通用的，只有最合适的。
比如，哪种电泳模式，电压需要多大，分离的目的是什么，等等。。。
满足需要的就是最合适的。

目前做电泳的厂家比较多，国外的BIO-RAD可以算是行业的老大，产品比较人性化，另外PARMACIA的也不错，其自动化水平较高。国内的六一仪器厂做的也比较早，如果考虑价格因素可以考虑。具体选型就要根据实验需要了。
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闲鹤野云
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2008/3/15 16:48:49 地板 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 menghandna 发表:
这个要根据实验需要来选择，没有通用的，只有最合适的。
比如，哪种电泳模式，电压需要多大，分离的目的是什么，等等。。。
满足需要的就是最合适的。

目前做电泳的厂家比较多，国外的BIO-RAD可以算是行业的老大，产品比较人性化，另外PARMACIA的也不错，其自动化水平较高。国内的六一仪器厂做的也比较早，如果考虑价格因素可以考虑。具体选型就要根据实验需要了。


多谢蛋白质版主，具体操作要求的分离1000D以下的小肽。如何制备样品我真的不懂，我会让学生多给你学习联络。不知6.1 仪器厂的价格为多少？
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2008/3/21 17:19:32 6楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 ruojun 发表:

多谢蛋白质版主，具体操作要求的分离1000D以下的小肽。如何制备样品我真的不懂，我会让学生多给你学习联络。不知6.1 仪器厂的价格为多少？


1000D以下的小肽通常认为不适合用常规的电泳系统分离，传统的Tris-甘氨酸-SDS-PAGE电泳分析分辨大分子物质的相对分子质量范围在１００００～２０００００，因此有人在凝胶中加入尿素来提高分离效果，也有推荐采用Tris-Tricine-SDS-PAGE胶电泳检测纯化后的小分子多肽,据说效果不错。
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闲鹤野云
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2008/8/25 17:03:51 7楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
好象溶解度不好,在什么缓冲体系下好溶解??
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2008/8/27 11:20:09 8楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 ruojun 发表:
好象溶解度不好,在什么缓冲体系下好溶解??

前处理的确是一个问题，尤其是成分比较复杂的情况。
由于电泳中的溶液一般都是无机的，所以如果含有一定量的酯类，糖类，核酸类等物质，将会给前处理带来很多困难，还有就是蛋白都有一个等电点，缓冲体系的PH越接近等电点，就越难溶解，所以通常的做法是尽量避开。另外对样品完成处理后，一定要离心取上清上样。
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闲鹤野云
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2008/8/28 15:23:31 9楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 menghandna 发表:
原文由 ruojun 发表:
好象溶解度不好,在什么缓冲体系下好溶解??

前处理的确是一个问题，尤其是成分比较复杂的情况。
由于电泳中的溶液一般都是无机的，所以如果含有一定量的酯类，糖类，核酸类等物质，将会给前处理带来很多困难，还有就是蛋白都有一个等电点，缓冲体系的PH越接近等电点，就越难溶解，所以通常的做法是尽量避开。另外对样品完成处理后，一定要离心取上清上样。

如果蛋白不能溶于缓冲液，一些蛋白就不能被展开吧，浓度有无要求，很久不做了，都不明白这些基本问题的答案了，多谢蛋白质版主耐心解释。
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menghandna
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2008/8/28 20:22:54 10楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 ruojun 发表:
原文由 menghandna 发表:
原文由 ruojun 发表:
好象溶解度不好,在什么缓冲体系下好溶解??

前处理的确是一个问题，尤其是成分比较复杂的情况。
由于电泳中的溶液一般都是无机的，所以如果含有一定量的酯类，糖类，核酸类等物质，将会给前处理带来很多困难，还有就是蛋白都有一个等电点，缓冲体系的PH越接近等电点，就越难溶解，所以通常的做法是尽量避开。另外对样品完成处理后，一定要离心取上清上样。

如果蛋白不能溶于缓冲液，一些蛋白就不能被展开吧，浓度有无要求，很久不做了，都不明白这些基本问题的答案了，多谢蛋白质版主耐心解释。

如果不能溶解是一定无法展开的，浓度不太低就可以，也不能太高，否则染色后是一大团，也无法鉴定了，一般10-20ug比较合适。
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