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主题：【求助】蛋白质聚合体中单体间化学键的种类鉴定

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madong5758

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发表于：2008/10/08 00:37:34 楼主管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

多方求助无果，希望有高人指点。急急
我们实验室在做重组人复合α干扰素（cIFN）的聚合与降解研究。cIFN单体中有两条分子内二硫键，它们在巯基乙醇作用下可以被还原打开，并且在空气中会形成分子间二硫键，进而引起cIFN聚合。再向这些聚合体中添加过量巯基乙醇后绝大多数的聚合体都被离解成单体，但是通过还原SDS-PAGE仍可以看到有微量的二聚体。理论上还原条件下二硫键是不存在的，所以我们推测这个二聚体应该是其他化学键引起的。我想知道的是：1、蛋白质除了二硫键是否还有其他的化学键可以引起蛋白质共价聚合体。2、用什么方法可以鉴定蛋白质聚合体中单体间的化学键？

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2008/10/8 0:43:40 沙发管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

我自己顶。。。。。。。。。。。

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It is me!

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2008/10/8 8:29:12 板凳管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

原文由 madong5758 发表:
再向这些聚合体中添加过量巯基乙醇后绝大多数的聚合体都被离解成单体，但是通过还原SDS-PAGE仍可以看到有微量的二聚体

SDS-PAGE 变性电泳，是一个很剧烈的变性过程。之前的二聚体在加巯基乙醇后会解聚，但是剧烈的变性时，有可能部分二聚来不及解聚，就骤然变性了，结构上就很复杂地结合在一起了。

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2008/10/8 9:24:58 马扎管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

原文由 hmzhou83 发表:
原文由 madong5758 发表:
再向这些聚合体中添加过量巯基乙醇后绝大多数的聚合体都被离解成单体，但是通过还原SDS-PAGE仍可以看到有微量的二聚体

SDS-PAGE 变性电泳，是一个很剧烈的变性过程。之前的二聚体在加巯基乙醇后会解聚，但是剧烈的变性时，有可能部分二聚来不及解聚，就骤然变性了，结构上就很复杂地结合在一起了。

同意！
SDS-PAGE并非严格意义上的去二硫键操作。一般我们要将蛋白中的二硫键完全打开，需要先使用尿素或盐酸胍等变性剂，然后用还原剂巯基乙醇或者DTT等，还原反应完全后加一些烷基化试剂将巯基保护起来，这样才能保证蛋白完全解离。
所以你在SDS-PAGE看到存在二聚体，并不能说明存在其他结合形式的聚体。

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