主题:【转帖】五种化学试剂的蛋清凝固效果及其防腐应用价值 !

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对广大版友来说,可能从事的都是分析,不知道有没从事研究的版友,这是我看到的一篇论文,感觉有一定用处,特转贴和大家分享!

五种化学试剂的蛋清凝固效果及其防腐应用价值

                                              姜吉良 吴 斌 邓香群

      【摘要】目的:为尸体防腐剂改良研究积累资料。方法:将所选的五种化学试剂各配成几种不同浓度的溶液,加入蛋清作为指示剂,观察其蛋白质的凝固过程及效果。结果:甲醛、乙醇、醋酸、戊二醛、苯酚均能使蛋清凝固;它们的适宜浓度分别是2%~15%、35%~80%、5%~30%、0.8%~4%、1.5%~10%;常用浓度下乙醇凝固蛋清的速度最快,其次是戊二醛,甲醛最慢。结论:蛋清是较好的蛋白质凝固指示剂;甲醛、戊二醛和苯酚对蛋清固定效果较好,乙醇和醋酸对蛋清固定效果较差。

      【关键词】化学试剂;蛋清;蛋白质凝固;适宜浓度;指示剂

        尸体腐败主要是因各种酶对组织中的大分子物质不断分解,使组织结构逐渐解体所致。导致腐败发生的酶来源有二:机体自身的组织细胞和自然界中无处不在的微生物(特别是细菌),前者引起“自溶”,后者引起“它溶”。众所周知,酶属于蛋白质,具有强大的催化作用,故任何可以使蛋白质变性凝固的化学试剂都可通过抑制酶的生物活性而起到防腐作用。换句话说,保证化学防腐效果的有效途径就是寻找性能优良的蛋白质凝固剂。使蛋白质变性凝固的化学试剂主要有醛类、醇类、酚类、重金属盐类及某些酸。笔者从其中选择五种有代表性、使用较广的化学试剂,并以蛋清为指示剂进行实验,观察它们凝固蛋白质的过程及效果,以期丰富防腐剂改良研究的资料和实验方法。

1 材料和方法

1.1 材料准备:

        实验前准备好的材料包括:蛋清300ml,蒸馏水1500 ml,分析纯甲醛、乙醇、戊二醛、醋酸、苯酚等化学试剂,100 ml和50 ml烧杯各30支,20 ml和50 ml注射器各两支,量筒、滴管、玻璃棒若干。

1.2 溶液配制:

        以各种试剂的常用浓度为标准配成中浓度溶液;以常用浓度的3/4、1/2配成两种低浓度溶液;以常用浓度的1.5倍、2倍配成两种高浓度溶液。每种浓度的溶液配制量均为50 ml。

1.3 指示剂的使用:

        为了便于观察蛋白质的凝固过程和效果,选择合适的指示剂是必要的。蛋清的蛋白质含量高,不含脂肪,新鲜时呈无色透明的胶状,不搅拌时不与水混溶,两者之间有明显的分界。实验时,通过注射器向每一杯配制好的溶液中缓慢加入10 ml蛋清。

1.4 蛋清凝固过程观察及判断:

        实验中,蛋清的蛋白质凝固时使蛋清发生三个方面的明显变化:一是颜色变化;二是透明度减低;三是流动性改变。当溶液中的蛋清表面形成一层完整的变色层,伴有流动性降低时,提示蛋清已发生显效凝固。当溶液中的蛋清团流动性丧失,用玻璃棒触碰无波动现象时,提示蛋清完全凝固。

1.5 蛋清凝固效果检查:

        蛋清完全凝固后,先记取杯中的溶液总量,然后将杯中的溶液到出并测量其量,用前者减去后者便得出杯中蛋清凝块的体积。取出蛋清凝块,观察其颜色、硬度、弹性、脆性等,然后再将蛋清凝块放入原烧杯中,进行开放气象保存。

1.6 补充实验:

        在各种试剂的高浓度组中,如最高浓度溶液中的蛋清凝固时间最短,则配制更高浓度的溶液进行补充实验,直至浓度增加不能缩短蛋清的凝固时间;在试剂的低浓度组中,如两周内溶液中的蛋清全部凝固,则配制更低浓度溶液继续实验,直至两周内蛋清只出现显效凝固,不发生完全凝固。

2 结果

2.1 试剂的适宜浓度:

        笔者将适宜浓度定义为化学试剂用来进行防腐处理时的合适浓度范围。在此范围内,既能保证试剂的防腐效果,又能控制其毒性和避免浪费。最短时间内使蛋清全部凝固的最低浓度为最高适宜浓度,在观察期内(两周)只能使蛋清产生显效凝固,不出现全部凝固的最低浓度为最低适宜浓度。根据实验得出:甲醛、乙醇、醋酸、戊二醛、苯酚的适宜浓度分别是2%~15%、35%~80%、5%~30%、0.8

~4%、1.5%~10%。
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2.2 常用浓度溶液凝固蛋清的特点:

        加入蛋清后,除醋酸溶液外,其余各溶液中的蛋清均沉入溶液底部,醋酸溶液中的蛋清大部漂在溶液上面凝固(附图)。试剂不同,其常用浓度溶液的pH值、蛋清凝固过程、形成的蛋清凝块特点不同(附表)。


2.3 蛋清凝块的稳定性

        蛋清凝块在开放气象条件下保存两周,甲醛和戊二醛溶液中形成的蛋清凝块出现了收缩变形、硬化和变脆现象,无霉变及腐败;被乙醇和醋酸凝固的蛋清凝块先后出现软化、液化、霉变和异味;被苯酚凝固的蛋清凝块表面出现一层砖红色物,凝块收缩较快。

3 讨论

3.1 甲醛是目前应用最普遍的防腐固定剂,其蛋白质固定效果确切而稳定。甲醛能与蛋白质分子上的多种基团(如氨基、羧基、羟基、巯基)发生反应,反应复杂且持续时间较长,特别是它可在相邻蛋白质分子链之间形成桥键,使蛋白质发生聚合凝固。此外,甲醛具有价格低廉、使用方便等突出优点,使其成为防腐剂之首选。但甲醛对人体的危害较大,表现在刺激性大、可引起器官损害和致癌促癌三个方面,有研究表明,甲醛通过与DNA反应而具有遗传毒性。为了减少和消除甲醛的危害,国内外学者设计了多种防腐剂改良配方和无甲醛配方。遗憾的是,至今尚无一种配方得到广泛认同和普遍使用。鉴于甲醛对蛋白质独特的聚合凝固特点,要保证尸体防腐处理的确切效果,在未找到更好的防腐固定剂前,人们只能对甲醛说:“怕你,恨你,真想甩了你不容易。”尽管如此,我们仍可在减少甲醛危害方面有所作为,方法主要有:将甲醛与其它防腐剂混合使用以降低甲醛浓度;用甲醛的不稳定化合物替代甲醛,减少防腐液中的游离甲醛;在防腐液中加入对甲醛分子有吸附作用的试剂,减少甲醛挥发等等。

        尸体经防腐固定后,自溶和尸体内它溶都不会发生,但仍可能出现污染性它溶。污染性它溶的“肇事者”是各种外源性微生物,最主要的是细菌。人类在与微生物的斗争中积累了丰富的经验,研究出了许许多多的药物,其中那些化学性质稳定、抗菌谱广的消毒剂和抗生素都可以成为我们不错的选择。现在多数医学院校仍以甲醛作为尸体和解剖标本防腐保存液的主要成分,这实际上造成了甲醛的“滥用”。可喜的是,有多种不含甲醛的防腐保存液已配制成功,并投入使用。可以说,保存已固定的尸体和标本早就具备了跟甲醛说“拜拜”的条件了。

3.2 乙醇和醋酸对人体的毒性都小,但挥发性大,蛋白质固定后的稳定性差,不能单独用作防腐固定剂。乙醇能溶解脂肪和类脂,影响脑的固定效果。高浓度乙醇脱水作用强,易引起标本收缩变形。乙醇是一种良好的有机溶剂,并对游离甲醛有吸附作用,配制混合防腐液时,通常用乙醇作为某些试剂的溶剂或用来减小甲醛的刺激性气味。乙醇挥发性大,据笔者观察,60%的乙醇在室温为10℃的开放条件下,24小时其挥发散失可达10%以上,故乙醇也不宜用作保存液的主要成分。醋酸的酸性较强,能溶解钙盐,使用浓度过高易造成骨质损害。醋酸固定组织会产生膨胀,可在混合防腐液的配制中用来对抗其它固定剂所引起的组织收缩变形。

3.3 戊二醛在临床上用来进行某些特殊医疗设备的消毒灭菌,它的使用被誉为化学消毒剂发展史上的第三个里程碑。戊二醛和甲醛同属醛类,它们使蛋白质变性凝固的原理相似,但戊二醛有两个活泼的醛基,可与蛋白质发生交联以戊二醛和乙醇处理的生物瓣膜具有较好的耐久性。戊二醛虽然挥发性小,对皮肤黏膜的刺激小,但对人体具有中等毒性。戊二醛是强变应原,它引起的变态反应通常在再次接触后的数分钟至数天内发生。戊二醛的活性在一定范围内随pH值升高而增强,PH值为7.2~8.5时活性最强。但戊二醛在碱性溶液中易聚合而丧失活性,且其聚合是不可逆过程,产生的聚合物毒性明显降低。如何利用戊二醛的这一特点,用它来取代效果好但危害大的甲醛是一个很有研究价值的问题。

3.4 苯酚又名石炭酸,在冷水中溶解度低,易溶于乙醇。经苯酚固定的蛋白质或组织的硬度低,高浓度(10%以上)苯酚腐蚀性强,低浓度苯酚可引起神经末梢麻痹。苯酚与空气接触易被氧化产生对苯醌,形成红褐色沉淀附于标本表面使其色泽不佳。苯酚的这些缺点限制了它在防腐处理过程中的应用。但苯酚的防腐抗菌力强,可用于某些皮肤病的治疗,其强大的抗霉变能力,在防止标本霉变中有重要应用价值。

参考文献

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