似乎原来见过,我找找看
找到了,如下:
火锅底料中辣椒素测定方法-高效
液相色谱法
A.1 原理
样品中的辣椒素用甲醇+四氢呋喃(50+50)混合液提取,然后用高效
液相色谱法C18反相柱经二极管阵列检测器检测,以保留时间和200nm~350nm扫描图谱定性,峰面积定量。最小检出量为1.0mg/kg•L,线性范围为0mg/L~100mg/L。
A.2 试剂
A.2.1 超纯水用符合GB/T 6682一级水。
A.2.2 甲醇 色谱纯。
A.2.3 四氢呋喃 分析纯重蒸后使用。
A.2.4 标准物质:辣椒素(纯度≥99%)、二氢辣椒素(纯度≥90%)
A.2.5 辣椒素标准溶液的配制
精确称取辣椒素和二氢辣椒素,用甲醇配成浓度为 1mg/mL辣椒素和1mg/mL 二氢辣椒素的标准贮备液,贮于冰箱中备用。使用时用甲醇稀释成0.1mg/mL 的辣椒素和二氢辣椒素标准使用液。还可根据需要可进一步用甲醇稀释至适当浓度。
A.3 主要仪器和设备
A.3.1 高压
液相色谱仪(二极管阵列检测器)。
A.3.2 ODS C18 反相柱,4.6mm×250mm ,5µm。
A.3.3 分析天平:感量0.1mg。
A.3.4 组织捣碎机。
A.3.5 数控型 超声波清洗器(超声工作频率:40KHZ±10%,输入超声电功率:100W±30%;数显温度可调:20℃-80℃±10℃)。
A.3.6 离心机 3000r。
A.3.7 旋转蒸发器。
A.4 测定方法
A.4.1 试样提取
A.4.1.1 半固体底料
将样品均质后,准确称取10.00g样品于100mL烧杯中,加入甲醇+四氢呋喃(50+50)混合溶液50mL,用保鲜膜封口后放在 60℃ 水浴条件下,使用超声波清洗器提取30min,离心5min,取上清液。然后,将渣滓再用甲醇+四氢呋喃(50+50)混合溶液50mL,使用超声波清洗器提取10min,再重复提取残渣一次。合并三次上清液,70℃~75℃ 温度下浓缩至(40~50)mL后,置于分液漏斗中,弃去油相,再用甲醇+四氢呋喃(50+50) 混合溶液定容至50mL,经0.45µm滤膜过滤后进行色谱分析。根据样品中辣椒素总量和检测器的灵敏度,必要时可以改变稀释浓度。
A.4.1.2 固体底料
将样品融化后均质,凝固后称量。提取、浓缩步骤同B.4.1.1。浓缩后,置于-4℃冰箱中2h,离心,取上清液,甲醇+四氢呋喃(50+50)混合溶液定容至50mL,经0.45µm 滤膜过滤后进行色谱分析。
A.4.2 测定
A.4.2.1
液相色谱测定参考条件
洗脱液:A水,B乙睛。
梯度洗脱:检测波长:280nm;流速:l.0mL•min-1;记录时间:45min;进样量:20μL(标样10μL)。梯度条件见下表。
表 梯度条件
时间(min) 流动相 曲线
A% B%
0 55 45 线性
10 50 50 线性
25 35 65 线性
40 0 100 线性
45 0 100 线性
47 55 45 线性
A.4.2.2 测定
按4.2.1的条件进行HPLC分析,用标准物色谱峰的保留时间定性;用外标法单点或多点校准法,以峰面积定量。
A.4.2.3 辣椒素和二氢辣椒素标准品色谱图见下图。
图 辣椒素和二氢辣椒素混合对照品HPLC图谱(a为辣椒素;b为二氢辣椒素)
A.5 测定结果计算
A.5.1 辣椒素总量计算
辣椒素总量以辣椒素与二氢辣椒素之和除90%计。
A.5.1.1 辣椒素含量计算见(A.1)式。
…………………………………(A.1)
式中:
X1——试样中辣椒素的含量,单位为毫克/克(mg/g);
C1——由标准曲线上查到辣椒素的含量,单位为微克/毫升(µg/mL);
V——样品定容体积,单位为毫升(mL);
m——样品质量,单位为克(g)。
99%——辣椒素标样纯度,单位百分数(%);
2——进样量扩大倍数。
A.5.1.2 二氢辣椒素含量计算公式见(A.2)式。
…………………………………(A.2)
式中:
X2——试样中二氢辣椒素的含量,单位为毫克/克(mg/g);
C2——由标准曲线上查到二氢辣椒素的含量,单位为微克/毫升(μg/mL);
V——样品定容体积,单位为毫升(mL);
M——样品质量,单位为克(g)。
90%——二氢辣椒素标样纯度,单位百分数(%);
2——进样量扩大倍数。
A.5.1.3 辣椒素总量计算公式见(A.3)式。
…………………………………(A.3)
式中:
X——试样中辣椒素总量的含量,单位为毫克/克(mg/g);
X1——见(A.1)式;
X2——见(A.2)式;
90%——规定的常数,单位为百分数(%)。
A.5.2 测定结果的允许偏差
同一实验室,同时测定或重复测定辣椒素和二氢辣椒素的计算结果偏差绝对值≤10%。