主题：【求助】试管目光测定法和分光光度法测定蜂蜜中的淀粉酶

最近有几批蜂蜜原料，我用试管目光测定法和分光光度法测定蜂蜜中的淀粉酶的酶值相差很大。试管目光测定法测定结果为10多一点，而分光光度法测定的结果却是25，这是为什么啊？辈做过愿意赐教的啊？


目光比色发(试管发)

(一)原理

  1.淀粉酶能将淀粉水解为精糊.麦芽糖,最终分解为葡萄糖.水解条件要求条件pH5.3,温度为40℃时淀粉酶作用活力最高,其反应式为:



  2.淀粉与碘作用生成蓝色化合物,所以试管中的试剂空白为蓝色.如果样液仍然是蓝色,那么说明试验中加入的淀粉被蜂蜜中的淀粉酶水解为葡萄糖.

  3.淀粉酶值系指1g蜂蜜中所含淀粉酶,在一定条件下可以转化1%淀粉溶液的体积(mL).

(二) 试剂

(1)NaOH溶液(0.05mol/L)    称取2.0g氢氧化钠溶解于1000mL 经煮沸冷却后的水中.

(2)NaCl溶液(0.1mol/L)  称取0.59g氯化钠溶解于100mL水中.

(3)CH3COOH溶液(0.02mol/L) 吸取 1.0mL冰醋酸,加入800mL水中.

(4)淀粉溶液(1.0%) 准确称取1.0g可溶性淀粉于烧杯中,加入少量水使成薄浆,加入60mL煮沸蒸馏水,在搅拌下煮沸1～2min,使淀粉溶液呈透明,稍冷,用水将淀粉溶液移入200mL容量瓶中.冷却后用水稀解至刻度,摇均.次溶液临时配制.其pH为4.8～5.5检查此溶液时,吸取0.2mL淀粉溶液,用蒸馏水稀解至30mL,加人0.1mol/L(1/2 I2)溶液,,应呈纯蓝色.

(5)1/2 I2溶液(0.1moL/L) 称取13.0g在升华的碘和18.0g碘化钾,溶于100mL水中,并用水稀释至1000mL,摇均,储存于棕色具塞玻璃瓶中.

(6)酚酞指示剂  1%乙醇溶液.

(三)操作方法

  称取10.0g试样,溶解于50～70mL水中,加入酚酞指示剂4滴,用0.05mol/L NaOH溶液中和至中性.将此溶液移入100mL容量瓶中,用水稀释至刻度,混均.

  取大小相同的试管12个,做好序号标记,安表7-5分别顺序加入蜂蜜试样溶液.蒸馏水.  0.02mol/LCH3COOH溶液. 0.1mol/L NaCl溶液和1%淀粉溶液.摇均,立刻将所有试管同时放入水浴中,使试管液面在水浴下面约为2.5cm,在此温度下放置1h. 取出后立即将所有的试管同时放入冰水浴冷却. 随即在每一试管中加入1滴0.1mol/L(1/2I2)溶液,摇均后立即观察(必要时再多加1滴碘溶液后观察).此时各试管的颜色顺序,由黄色经红色.紫红色至蓝色. 根据紫红色试管的号数由表7-5查的被测样品的淀粉酶值.

  说明:本法所用蒸馏水均需煮沸后冷却.


表7-5 蜂蜜中淀粉酶值表

试管序号 试样溶液 蒸馏水 0.02mol/L CH3COOH 0.1mol/L NaCl 1%淀粉液 总体积 /mL 淀粉酶值
1 10 4.0 0.5 0.5 1.0 16 1.0
2 10 2.5 0.5 0.5 2.5 16 2.5
3 10 0.0 0.5 0.5 5.0 16 5.0
4 7.7 2.3 0.5 0.5 5.0 16 6.5
5 6.0 4.0 0.5 0.5 5.0 16 8.3
6 4.6 5.4 0.5 0.5 5.0 16 10.9
7 3.6 6.4 0.5 0.5 5.0 16 13.9
8 2.8 7.2 0.5 0.5 5.0 16 17.9
9 2.1 7.9 0.5 0.5 5.0 16 23.8
10 1.7 8.3 0.5 0.5 5.0 16 29.8
11 1.8 3.7 0.5 0.5 5.0 16 38.5
12 1.0 9.0 0.5 0.5 5.0 16 50.0


分光光度法是按照GB/T 18932.16--2003的方法做的啊。
分光光度法见附件
 
分光度法测定蜂蜜中淀粉酶值