主题：【求助】苏丹红检测中SPE柱子洗脱问题

你好，你用的小柱有问题的，国家的标准有些地方也有问题，出入境的标准是不能用的，我这几天也在做，结果还不错，你有问题可以联系我。

苏丹红前处理试剂盒
—高效液相色谱法

一、范围

  本方法规定了动物源性食品中苏丹红Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ残留量的快速测定方法。

二、方法原理



  试样中的残留的苏丹红经快速检测前处理试剂盒提供的试剂提取、浓缩、净化后用液相色

 

  谱进行检测，外标法定量。



三、试剂和材料



  除另有规定外，所有试剂均为分析纯，水为重蒸馏水。



  1、乙腈：色谱纯。

 

  2、冰乙酸：色谱纯。

 

  3、无水乙酸钠。

 

  4、对-甲苯磺酸。

 

  5、正己烷：色谱纯

 

  6、乙酸盐缓冲液：称取4.950g无水乙酸钠及0.950g对-甲苯磺酸，溶解于950mL水中，

   

    用冰乙酸调节溶液pH到4.5，最后用水定溶到1000mL。

 

  7、标准品: 苏丹红Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ

 

  8、标准贮备溶液:分别称取标准品苏丹红Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ各10.0mg，用乙腈溶解后转移

   

    至10mL棕色容量瓶中，用乙腈定容，于—20℃条件下保存。使用时，用乙腈稀释上述

   

    标准储备溶液，配制成不同浓度的标准工作液。

 

  9、苏丹红快速检测前处理试剂盒。

四、仪器和设备

4.1高效液相色谱仪：配紫外-可见检测器。

4.2匀浆机。

4.3旋转蒸发仪。

4.4离心机：4000 r/min

4.5聚四氟乙烯离心管:100 mL，具塞。

4.6微孔滤膜:0.45 µm。

五、测定步骤

  5.1准确称取已捣碎的样品5.00 g于50 mL离心管中,先加苏丹红快速检测前处理试剂盒

    中的提取剂(液体20.0 mL)、8000r/min均质1min，于4000 r/min离心5 min。

  新柱激活：对于第一次使用的层析柱，依次加入2ml洗脱剂（色谱纯乙腈+冰乙酸

 

  =98+2（V/V））、5ml洗涤剂（冰乙酸+甲醇=20+80 V/V）、5ml蒸馏水挤干。

 

  净化：取上清液10mL于50mL试管中，加入20mL水混匀，分次加入层析柱中，用吸耳球从上口

 

  挤压加快流速或用固相萃取机从下抽真空，液体流完后加5mL洗涤剂（乙腈+水=20+80

 

  （V/V））洗涤，挤干柱中液体，加1.0mL乙腈洗脱。收集洗脱液，微孔滤膜过滤，滤液供仪

 

  器测定。



  5.2绘制标准工作曲线

移取苏丹红混和标准溶液， 50µg/kg、100µg/kg、200µg/kg、500µg/kg、



100µg/kg标准工作溶液,样液用高效液相色谱仪测定，得出标准工作曲线。

  5.3测定

  5.3.1液相色谱条件

a) 色谱柱: C18柱，150 mm×4.6 mm(i.d.),粒度5µm;

b) 流动相:乙腈+乙酸盐缓冲液 (80+20,体积分数);

c) 流速:1.0 mL/min;

d) 柱温:室温;

e) 检测波长：490nm

f) 进样量：20 µL。

 

  5.3.2色谱测定



根据样液中苏丹红的含量情况，选定峰面积相近的标准工作溶液。标准工作溶液和样液



中的苏丹红响应值均应在仪器的检测线性范围内。

  5.3.3空白实验

除不加试样外，按上述测定步骤进行。

 

  5.3.4结果计算



用色谱数据处理机或按式（1）分别计算供试样品中的苏丹红残留量。

                      2 ci×V

ω=  —————　…… (1)

  m



ω－样品中苏丹红残留量，μg/kg；

ci －标准曲线上查出试样溶液中苏丹红标准工作溶液的浓度，μg/L；

2－换算常数；

V－最终定容体积数，mL；

m－供试试料样品重量，g。

六、测定低限、回收率

  6.1检测限



本方法的检测限苏丹红为10μg/kg。

 

  6.2回收率



本方法回收率苏丹红为:6 5%～105%。

原文由 wugang1978(wugang1978) 发表:
你好，你用的小柱有问题的，国家的标准有些地方也有问题，出入境的标准是不能用的，我这几天也在做，结果还不错，你有问题可以联系我。

你好！看到你的帖子，我想请教一下关于苏丹红过SPE小柱的问题，可以吗？

可以详细描述一下吗？我也在做呢，问题是柱子对目标物不保留。请问你用的是什么柱子？

你加标回收率 做了吗 ， 你用商品化柱子 问企业要一下洗脱方法，不然需自己摸索

是不是没洗下来呢

商品化的柱子也有问题，含水率对样品保留影响很大，不好控制。柱子开封以后就容易变化。我们目前都用GPC做

原文由 semibeauty(semibeauty) 发表:
商品化的柱子也有问题，含水率对样品保留影响很大，不好控制。柱子开封以后就容易变化。我们目前都用GPC做

GPC不是每个企业都买的起的，再说买的起，用起来成本也高的，试剂要求很高。
安谱已经开发出了MIP-SDR分子印迹苏丹红专用柱，克服了氧化铝柱子的各种问题和GPC昂贵的缺点。现在很多客户已经不用国标的氧化铝柱子了，
这是客户发的应用帖子：http://bbs.instrument.com.cn/shtml/20131017/5014889/index_1.shtml
http://www.docin.com/p-941151407.html
希望可以参考

固相萃取小柱进样前用少量水去活，然后加甲醇净化几遍，再加正己烷预淋洗，以上步骤做完再进样品。
还有，在做样品加标前，先做标准品过柱算回收率

您好，我近期也有碰到食品中加标苏丹红，回收率非常低的情况。我用的是国标方法，中性氧化铝柱子，刚开始做回收率很低，后来又重复做，发现有柱子对目标物不保留的情况，不知道您最后是怎么解决的呢？环境专业学生党，第一次做食品类的，被困扰许久，真的是求助无门啊，期待您的回复！谢谢！