大家好，我是本科的，目前要自己进行一个比较大的实验，所以有些问题想求助各位。

预实验已经做了，但是都不尽人意，下面有几个问题想求助各位，因为带我做实验的老师基本上问什么都让我看论文，但是论文基本没有比较详细的方法。

请问水溶性蛋白的提取一定要用缓冲溶液吗，如果直接用去离子水可不可以？

请问藻蓝蛋白和别藻蓝蛋白是不是提取出溶液后就直接用分光光度计比色？

叶绿素含量和叶绿素荧光不同吗，是否一个代表含量一个代表叶绿素的活性？

小球藻如果没有经过冻融，直接用超声波粉碎机破碎，一般需要多少时间？

谢谢各位了！

虽然量少，但是每个样品都要破碎而且要测的量也多，想尽快做完。

推荐答案：dayoupan回复于2010/02/23

你好，回答其中几个问题。
1 蛋白缓冲液问题：一般目标都是获得带活性的蛋白。在整个蛋白制备过程中，有许多破坏活性的因素，具体问题具体分析，它们可能是某些敏感离子、添加剂、pH、有机溶剂、温度、光线等。在所选缓冲盐对目的蛋白活性没有破坏的条件下，使用缓冲液的目的是获得相对稳定的pH环境，这只是保住目的蛋白活性的一个方面。但是如果你的目的蛋白是个耐折腾的，在很宽酸碱度下都有活性，那水也未尝不可。关键的是综合考虑一直维持住活性。
2 蛋白含量测定方法就有限的三四种，比如280nm、福林-酚、考马斯亮蓝法、BCA法。直接用紫外测280nm的适用于层析分离出的较纯蛋白，其它的都是反应显色的，对灵敏度、抗干扰性各有优缺点。不妨比对一下你的具体蛋白来源和性质选择。
3 不知。
4 实践出真知。以目的蛋白活性和含量为指标，选不同时间超声破碎比较活性与含量，超声时间越长含量可能越高活性可能越低，最后权衡选哪个条件或者换方法。

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2010/2/22 23:49:43 沙发管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

请上网查找相关的资料比较好的，另外多请教您的老师啊！

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dayoupan

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2010/2/23 14:25:37 板凳管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

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2010/2/23 15:27:44 马扎管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

叶绿素含量和叶绿素荧光肯定不同，叶绿素荧光只是它另外一个方面的表现，通俗点理解可以认为是杂质等物质的一个参数

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zrj518158

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2010/2/24 0:00:36 地毯管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

首先十分感谢以上三位大大的回答，其实最有问题的是蛋白质方面的，准备开学去问教蛋白质的老师。测定的是水溶性蛋白，藻蓝蛋白和别藻蓝蛋白三种，还有SOD的活性，决定还是用磷酸缓冲溶液提取，用小牛血清白蛋白做标准曲线。搞明白了做起来也有底气，写论文也更方便。
做叶绿素荧光是因为老师说这个数据是国际上都承认的一个数据，但是我们那里的荧光仪不稳定，说不定哪天就罢工了，如果有哪位大大知道的还请告诉我，谢谢大家的帮助。

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