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主题：【讨论】荧光分光光度计激发偏振器与发射偏振器互相垂直的荧光强度怎么测?

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yuchao206
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发表于：2010/04/21 17:00:51 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
荧光分光光度计激发偏振器与发射偏振器互相垂直的荧光强度怎么测?（目的是测荧光各项异性）

F4500有个荧光偏振附件 两个镜子角度可调 我想问一下 测平行的荧光强度是两个都调到0度，                                                                                                    但测垂直的荧光强度是两个都是90度还是 0°，90°或是90°，0°呢？这样测出的值都不一样啊
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2010/5/3 22:34:01 沙发 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
请问你的荧光偏振附件是自己买的 还是买仪器的时候就给的  我用的是F6500没有这个附件
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2010/5/3 23:41:40 板凳 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
是仪器自带的 我们学校没人用过这个附件
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fragr
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2010/5/4 21:19:12 马扎 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 yuchao206(yuchao206) 发表:
荧光分光光度计激发偏振器与发射偏振器互相垂直的荧光强度怎么测?（目的是测荧光各项异性）

F4500有个荧光偏振附件 两个镜子角度可调 我想问一下 测平行的荧光强度是两个都调到0度，                                                                                                    但测垂直的荧光强度是两个都是90度还是 0°，90°或是90°，0°呢？这样测出的值都不一样啊


请参照使用说明书

还有一步是要测量G因子，

各向异性是代表程度和趋势，绝对值是没有意义的。
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2010/5/5 10:38:11 地毯 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
说明书现在找不到了…你知道这个G因子要怎么测么 一般大概为多少呢？
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悠旸
ihqs
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2010/5/5 11:24:27 地板 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
我认为应该是90度，90度。其实这个附件叫做手动偏振附件，是用于测试偏光度和各向异性的。具体的说明书打电话800－810－7890向天美公司所取，应该可以提供的。
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2010/5/6 9:12:11 6楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
恩 是手动的 我就是用它来测量荧光各向异性的 我们学校这台还是日立公司的…
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wade
wry413
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2010/5/9 21:12:57 7楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 yuchao206(yuchao206) 发表:
荧光分光光度计激发偏振器与发射偏振器互相垂直的荧光强度怎么测?（目的是测荧光各项异性）

F4500有个荧光偏振附件 两个镜子角度可调 我想问一下 测平行的荧光强度是两个都调到0度，                                                                                                    但测垂直的荧光强度是两个都是90度还是 0°，90°或是90°，0°呢？这样测出的值都不一样啊


据我了解，荧光偏振一般包括两个概念，一个是偏振因子，一个是各项异性。一般仪器都是在测试过程直接把这两项算出来的。
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2010/5/9 21:15:43 Last edit by wry413
happydog2004
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2010/11/19 11:49:36 8楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
个人理解（还请高手指点）：

    由于单色器和光电倍增管等对垂直和水平两个偏振成分的敏感度不同，因而严格的测定需要引入校正因子G。
    G为水平偏振光激发样品时，仪器对垂直偏振光的透射效率与对水平光透射效率之比，定义为G=Ihv/Ihh。

    经校正后的荧光偏振度：P = (I∥-I⊥)/(I∥+I⊥) = (Ivv-GIvh)/(Ivv+GIvh)

    经校正后的不对称度：A = (I∥-I⊥)/(I∥+2I⊥) = (Ivv-GIvh)/(Ivv+2GIvh)

    注：下标中的前、后两个字母分别表示入射光和发射光的偏振方向，V(vertical)表示垂直，H(horizontal)表示水平，
    如：Ivh为起偏器取向垂直而检偏器取向水平时测得的荧光强度，
        Ivv为起偏器和检偏器均为垂直取向时测得的荧光强度；
        Ihv为起偏器水平取向而检偏器垂直取向时测得的荧光强度，
        Ihh为起偏器和检偏器均为水平取向时测得的荧光强度。

    上述Ivh、Ivv、Ihv、Ihh是否就可以用F-4500型荧光分光光度计的偏振附件进行测量了？
该帖子作者被版主 pfz1985加 10积分， 2经验，加分理由：讨论
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2010/11/19 11:52:17 Last edit by happydog2004
hbchendl
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2011/1/27 22:32:03 9楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
有个简单的方法：
一般两个偏振片的方向一致时，重迭起来是透光的。方向垂直则不透光。这一点大家都知道。
在荧光分光光度计上，如何判断两个偏振片都是水平或垂直呢？在通常情况下，Ihh的数值会大于Ivv。
Ihv与Ivh的数值相差不大。
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