快速导航采购仪器提醒

生命科学仪器综合讨论

版主:

入住本版

专家:

仪器信息网

居民列表

仪器社区 > 生命科学仪器 > 生命科学仪器综合讨论帖子详情

快速回复发表新帖最新帖

主题：【讨论】酶标仪和分光光度计的区别，继续。。

浏览0 回复22 电梯直达

高卧东山

结帖率：

100%

关注：0 |粉丝：0

新手级：新兵

发表于：2010/05/19 20:23:51 楼主管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

课题组有一同学苦于某个实验样品量太多，想用酶标仪代替分光光度计测定OD值。毕竟比色皿一个个测多辛苦，哪有酶标板来得顺畅。
我虽然觉得这个想法有点crazy，但一时也找不到太多反驳的理由。
毕竟两者原理几乎一样，而且酶标仪似乎功能更加全面；
可是如果真的可以完全通用，为什么那些方法和标准里为什么只字不提仪器可以是“紫外-可见分光光度计或连续波长酶标仪”呢？

思来想去还是决定先在网上查个意见
于是我在本坛挖出了06年的一个帖子 http://bbs.instrument.com.cn/shtml/20060414/393995/

这里面某些说法就不必再提了，肯定不是答案。
比如一个测的是光密度一个测的是吸光度的说法。其实OD和absorbance根本就是一回事（见http://en.wikipedia.org/wiki/Absorbance）
又比如酶标仪用的是滤光片的说法。现在在科研领域，连续波长的酶标仪早就普及了，相对而言医用酶标仪还常有使用滤光片的。

我还见过一种说法，说一个是垂直光路一个是水平光路。此话倒是不假，可这种说法无法解决我的疑虑。作为终端用户，关注的只是准不准，符合不符合检测要求，至于实现的技术手段那是黑猫白猫的事情了。

不过，在那个帖子的最后一层，我看到这么一种说法

“分光光度计测量的是以空白溶液为参比，在约定厚度（一般为1cm）的量池中的相对吸光值。因此不同仪器，不同批次测量的数据具有同样的可比性。而酶标仪测定时其光路长度不确定，也无空白参比，得出的是特定条件下的绝对值，因此即使是同一台仪器，不同测量批次之间也其数据不具备直接的可比性。”

我觉得这种解释很有新意，而且似乎也颇有道理。但遗憾的是，话题直到这里就终结了，于是我想把这个话题继续，大家不妨来讨论一下，到底酶标仪和分光光度计有什么重要差别使得至今没有完全通用呢？

该帖子作者被版主 bigbearbigbear加 5积分， 2经验，加分理由：讨论

1
赞贴
22
回帖
0
收藏
0
拍砖
版主
招募

为您推荐

近期热榜

热门活动

您可能想找: 气相色谱仪(GC) 询底价

选参数看心得找厂商查方案

专属顾问快速对接

立即提交

相关阅读

wzwcs007

禁止发帖修改昵称

ID：wzwcs007

行业：其他

积分：0升级还需100积分

声望：0升级还需100声望

注册时间：0000-00-00

最后登录时间：0000-00-00

进入iLog 私信关注

结帖率：

100%

关注：0 |粉丝：0

新手级：新兵

2010/5/20 11:58:12 沙发管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

我也很疑惑，很关注~~我也想知道答案~顶上，请牛人解答~

赞贴

拍砖

3kkk

结帖率：

100%

关注：0 |粉丝：0

新手级：新兵

2010/5/20 12:32:51 板凳管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

同样期待有解答

赞贴

拍砖

高卧东山

禁止发帖修改昵称

ID：littlewing

行业：其他

积分：0升级还需100积分

声望：0升级还需100声望

注册时间：0000-00-00

最后登录时间：0000-00-00

进入iLog 私信关注

结帖率：

100%

关注：0 |粉丝：0

新手级：新兵

2010/5/22 14:18:35 马扎管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

不过我再想一下，绝对值、相对值的说法也没有太大意义

因为即便如此，只有每板都做一个标准曲线用于校正，那么每次的误差就足以被消除了..

赞贴

拍砖

It is me!

禁止发帖修改昵称

ID：hmzhou83

行业：其他

积分：0升级还需100积分

声望：0升级还需100声望

注册时间：0000-00-00

最后登录时间：0000-00-00

进入iLog 私信关注

结帖率：

100%

关注：0 |粉丝：0

新手级：新兵

2010/6/2 15:44:56 地毯管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

我觉得如果不是需要什么标准的话，仅仅作为实验结果的话是可以使用酶标仪的。

赞贴

拍砖

高卧东山

禁止发帖修改昵称

ID：littlewing

行业：其他

积分：0升级还需100积分

声望：0升级还需100声望

注册时间：0000-00-00

最后登录时间：0000-00-00

进入iLog 私信关注

结帖率：

100%

关注：0 |粉丝：0

新手级：新兵

2010/6/4 9:54:58 地板管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

原文由 It is me!(hmzhou83) 发表:
我觉得如果不是需要什么标准的话，仅仅作为实验结果的话是可以使用酶标仪的。

我现在也觉得目前没有什么理由认为不能通用

赞贴

拍砖

gybgyb

禁止发帖修改昵称

ID：gybgyb

行业：其他

积分：0升级还需100积分

声望：0升级还需100声望

注册时间：0000-00-00

最后登录时间：0000-00-00

进入iLog 私信关注

结帖率：

100%

关注：0 |粉丝：0

新手级：新兵

2010/6/4 16:59:06 6楼管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

最后一个解释是有道理的：
OD值和吸光系数, 待测组分的浓度, 还有光路长度成正比关系。分光光度计采用的比色杯的宽度都是1cm，而酶标仪采用的是垂直光路, 所以光路的长度应该是样体液面的高度。所以测得的值受到样品的体积的影响, 现在有些酶标仪可以通过软件将光路转化为1cm光路长度下的吸光值, 这样就不会受到批次的影响, 而且还可以与分光光度计测得的值进行比较。供参考

该帖子作者被版主 littlewing加 5积分， 2经验，加分理由：积极讨论

赞贴

拍砖

zwyu

结帖率：

100%

关注：0 |粉丝：0

新手级：新兵

2010/6/4 18:20:57 7楼管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

认同该说法。每次拿移液枪往里加样品，是很难保证加的完全一样的。而且，空白的确定也是个问题。

原文由 高卧东山(littlewing) 发表:
不过，在那个帖子的最后一层，我看到这么一种说法
“分光光度计测量的是以空白溶液为参比，在约定厚度（一般为1cm）的量池中的相对吸光值。因此不同仪器，不同批次测量的数据具有同样的可比性。而酶标仪测定时其光路长度不确定，也无空白参比，得出的是特定条件下的绝对值，因此即使是同一台仪器，不同测量批次之间也其数据不具备直接的可比性。”

原文由 gybgyb(gybgyb) 发表:
最后一个解释是有道理的：
OD值和吸光系数, 待测组分的浓度, 还有光路长度成正比关系。分光光度计采用的比色杯的宽度都是1cm，而酶标仪采用的是垂直光路, 所以光路的长度应该是样体液面的高度。所以测得的值受到样品的体积的影响, 现在有些酶标仪可以通过软件将光路转化为1cm光路长度下的吸光值, 这样就不会受到批次的影响, 而且还可以与分光光度计测得的值进行比较。供参考

该帖子作者被版主 littlewing加 5积分， 2经验，加分理由：积极讨论

赞贴

拍砖

高卧东山

禁止发帖修改昵称

ID：littlewing

行业：其他

积分：0升级还需100积分

声望：0升级还需100声望

注册时间：0000-00-00

最后登录时间：0000-00-00

进入iLog 私信关注

结帖率：

100%

关注：0 |粉丝：0

新手级：新兵

2010/6/7 13:17:34 8楼管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

楼上两位说得很好。

理论上这样讲没错，不过实际影响究竟如何还要考虑一下。比如移液枪的误差，每次肯定是很难完全一样。但熟练的操作人员应该能保证足够的精确度。可以这么想，定量PCR的量不也完全是靠枪来控制的么？初始模板的量只要稍有差异，最后结果就会被放大至数量级的误差。可是定量PCR也能做到平行的重现性极好啊。

批次的问题更好解决了。每次做一组校正曲线，那么仪器状态的差异基本上就做为系统误差消除了。定量PCR也是这么做的。

该帖子作者被版主 zhang8826857加 3积分， 2经验，加分理由：积极讨论加分

赞贴

拍砖

zwyu

结帖率：

100%

关注：0 |粉丝：0

新手级：新兵

2010/6/7 13:36:17 9楼管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

能不能这样想：那些标准的制定者考虑的是不要主动增加难度（包括操作、人员培训）或仪器成本，如你所言，现在好的连扫PCR确实可以干简单的紫外分光光度计的活；但是与UV比起来，其仪器普及率、人员熟练度等，从统计意义上肯定是远远不如了。就像有些紫外分光光度计测的东西，你非上带UV检测器的液相去测，可能也能得到差不多准确的结果，可你能在相关标准中再加上一句“或带UV检测器的LC”吗？

原文由 高卧东山(littlewing) 发表:
楼上两位说得很好。

理论上这样讲没错，不过实际影响究竟如何还要考虑一下。比如移液枪的误差，每次肯定是很难完全一样。但熟练的操作人员应该能保证足够的精确度。可以这么想，定量PCR的量不也完全是靠枪来控制的么？初始模板的量只要稍有差异，最后结果就会被放大至数量级的误差。可是定量PCR也能做到平行的重现性极好啊。

批次的问题更好解决了。每次做一组校正曲线，那么仪器状态的差异基本上就做为系统误差消除了。定量PCR也是这么做的。

赞贴

拍砖