既然大家这么感兴趣,我就多说几句,呵呵。个人先声明哦,不针对那哪个厂家,只是就事论事,表述中难免提到一些技术,但也仅是发表自己的看法,说的对大家就看下了,说的不对,还请指正,我也学习学习,先谢谢了!
因为我接触到氨基酸的检测分析工作有一段时间了,所以对氨基酸分析这个逐渐热乎的工作兴趣很浓厚,随着生活水平的提高,国人对保健肯定也越来越重视,各种保健品市场肯定也会越来越红火,但是具体哪个保健品适合自己,这时就需要用到氨基酸分析仪来分析(这里说的是专用氨基酸分析仪,不涉及到HPLC的做法,因为HPLC较专用氨基酸分析仪存在的问题比较多),自己缺哪些氨基酸就补哪些,这一点在国外很多国家都会对出生婴儿来做,预防一些疾病的发生,但是国内在80年代,甚至更早的时候就做过,但是因为不在医保的范围之内,所以,至今刚出生婴儿很少有做这方面的检测的。以上呢简单的说了下为什么对氨基酸分析有兴趣。
下面简短的说下,氨基酸分析仪这个领域内前沿的东西,因为认识的问题,存在表述不当的地方,还请指正。
氨基酸分析仪与
液相比较类似,但是与
液相的区别又很大,与
液相相比,氨基酸分析仪具有两个泵,外多一个衍生装置。因为氨基酸在通常条件下,对紫外吸收很弱,导致检测的灵敏度不够,所以需要衍生,至今为止被国际认可和采纳的是茚三酮衍生法。
下面就我们采购氨基酸分析仪过程中遇到的问题简单的陈述下,因为时间比较久了,可能有记忆不准的地方,为便于表述,按照各个部件来说吧:
1、泵,对于色谱来说,泵是不可缺少的,氨基酸分析仪具有两个泵,一个是输送洗脱液的,另外一个是输送茚三酮衍生试剂的。泵无非就是输送液体,但是在技术交流中遇到了问题,泵的最大量程问题,氨基酸分析与
液相有点区别的是流速要小,HPLC一般为1ml/min左右,而氨基酸分析一般为0.5ml/min左右,泵的最大量程决定着输液的准确性和稳定性,是选10ml/min的还是选1ml/min的?因为我们知道,我们在量取1ml的液体时首选的是1ml的量筒,而不是选10ml的量筒,一般要选在最大量程的50%左右时最准的,且越接近最小值误差越大,这个思维帮助我们解决了泵的选择问题。
2、自动进样器,这里需要特别强调一点,虽然都是自动进样器,但是定量方式不一样,有的是通过定量环,有的是通过马达,那个更准些需要用户根据自己的理解去判断,因为我们某家比较老的HPLC是手动进样,感觉定量环与六通伐之间存在残留比较大,做检出限和定量限的时候根本不需要进样,只需要把手动进样器扳倒LOAD模式,然后再扳到INJECT模式就已经能够达到定量限,甚至都要超过定量限,最后我们没有选择用定量环定量的,另外,对于色谱来说都是微量分析,所以即使购买定量定量的自动进样器,那么也没有必要配置超过100微升的定量环,除非做制备。所以在这点上,要注意,有的厂家会忽悠说我们可以为您配置1500微升甚至是5000微升的定量环,这里说实话,没有任何用处,除了你要做制备,否则谁会进1.5ml的进样量啊?有些厂家的话很能忽悠人,但是我们作为购买方一定要“淡定”,思考下,说的对与否及对于自己是否有用。否者就是厂家告诉我们他们的仪器上就是镶满钻石对于分析有和用处啊?除了抠下来卖钱,呵呵
3、分离柱,对于色谱来说,分离柱是心脏,这个谁都知道,氨基酸检测与
液相常用C18\C8柱子不一样是需要用到阳离子交换树脂,该树脂用户是可以自己进行重生、装填的,
所以柱子自我装填技术的成熟性就是需要严重考虑的问题了,一根柱子要在2-8万人民币,所以一定要考虑到柱子自行装填技术的成熟性,否则光买柱子就是很大的一笔开销,这里一定要注意哦。
另外就是柱子的树脂的微粒大小了,对于色谱来说,
树脂的颗粒越小,分离效果越好,所需要的时间就短,试剂的消耗就越少,成本越便宜(茚三酮比较贵啊),单位时间内分析的样品就多,要是检测机构,赚的就越多,没有购买仪器前,我们曾经委托某机构检测过一个样品,18种水解蛋白氨基酸500大洋啊!(按照一天10个样来计算,不用一年成本就赚回来了,所以检测机构很赚钱呢!羡慕下)疼死我们咧,呵呵。同样作为色谱的一个分支的氨基酸分析仪也是这样,君不见现在各个厂家都在推UPLC么,一个原因是柱效高了,分析时间短了,试剂消耗少了。所以如果认同这个观点,建议购买树脂粒径小的柱子,价格贵点,但是柱子是可以自己装填的,所以还算是比较实惠的。
4、衍生,一般有采用反应盘管和反应柱的,这就是看各自的判断了,上学的时候学过流利静力学的有关知识,所以对于管路来说,中间的流速快、与管壁接触的流速慢,这点还是可以理解比较到位的。现在的反应盘管做的越来越细,目的就是要减小这种现象。而反应柱,里面装填了固体颗粒,这样液体再流动的时候受到的阻力就一样,不至于出现中间快、周围慢的现象。个人认为,用户可以根据科技发展的趋势及自己的认识自己做判断那个好坏。我认为反应柱是挺有道理的,但是价格要贵些,一个合成塑料的,一个需要用到合金及填料,价格肯定不一样。个人感觉如果是检测单位、法检部们最好选用反应柱,至少理论上反应柱要优于反应盘管,对于一年做不了几个样品的用户来说,就无所谓了。
5、检测器,前面提到了氨基酸的检测需要衍生,衍生后一般选在570nm检测,但是因为脯氨酸在570nm的时候吸光度不大,所以需要在440nm的条件下检测,所以需要用到双波长检测器。这里遇到的问题是选择全波长扫描还是双波长检测器的问题。
在这里呢,就纯粹的是个人喜好了,我们的考虑如下,全波长扫描对于氨基酸检测没有什么实际意义,固定波长长久运行应该会更准些。
6、关于氨基酸分析仪还有一个很重要的问题是试剂的存放,茚三酮、茚三酮缓冲液本身是比较稳定的,但是一旦混合到一起后就很容易被氧化,所以需要低温保存,目前市场上有两种,一种是先把茚三酮及缓冲液混合到一起的但需要低温保存,另外一种是茚三酮极其缓冲液不预混合,要衍生的时候再混合,这样的保存期限据说可以长达一年。这两种说法是婆说婆有理,公说公有理。个人认为,需要低温保存的不大可取,要么需要冰箱,要么放试剂的仓具有冰箱的作用,但是要是放假或者是长期不用怎么办?总不能就倒掉吧?茚三酮很贵的。
先写这么多吧,等我再想想还拉下那些。说的不对的地方请指出哦,谢谢!