主题:【原创】对LC的认识(9)

浏览0 回复65 电梯直达
xue2009
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      针对大家比较关心LC保留时间的问题,我在前面有谈到过,可能不怎么详细,今天我们详细的来解决这个问题。
      首先关于保留时间偏移的问题。出现这个问题的原因有很多种;大家都能想到是流动相的问题、柱子脏或者固定相坍塌的问题,平衡时间不够的问题。在这里我主要想强调的是“目标组分在分离时的存在形式问题”,因为在某种流动相下,如果目标组分不是以单一的形式存在,那么肯定不仅得不到好的峰型,并且保留时间也是难于重现的。我想给大家说的是:影响目标物的存在形式主要是PH值,那么你如果分离的是酸性样品,一般就把缓冲液的PH值调到3,这样一般是可以让组分以一种形式存在的,就能避免PH值所带来的问题(这是我做LC的经验,因为我也是不喜欢一套一套理论,但有了实验现象后,我会对理论深究的);如果分离的是碱性化合物,这个要参照它在柱子上的保留时间来看的,我做了很多的有机碱,最多的情况是用酸性的缓冲液,PH值调到酸性的目的是使N(有机碱一般是含N化合物)结合质子,形成缔合物保留,所以有机碱的存在形式是阳离子。
   
还有一个问题,样品很“脏”,保留时间也是难于重现的,这可能是样品之间的基质效应影响,这种情况至于是为什么说实话我也没完全搞懂,咨询了很多人都说实际样品肯定有差异,我的理解是样品中的强保留杂质对柱子产生了“改性”影响,导致保留时间产生偏差。这不需要深究,我们只要保证样品尽量“干净”进LC分析就行啦。
    至于流动相问题,平衡时间不够的问题等等这都很容易判断。我在这里不细说。事实上我在实验中发现进样量过大也会有保留时间偏移的问题,并且偏移程度不消小,我也在考虑这种现象的原因,也希望大家能帮助我。
    还有一点,前面我有提到过“一个样品进6针算RSD”和“配制6个平行样品算RSD”,它们两者是具有不同意思的,前者评价的是仪器的紧精密度,而后者则是考察样品的重复性分析问题,后者的意义更大,如果仪器的精密度都不能保正,那做出的结果无任何意义可言。
     
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酸性样品ph为什么一定要是3呢,对柱子损伤挺大的

呵呵,这个是我的经验,一般3点多、4左右都是可以的,因为要抑制酸性样品的解离,使它以分子的形式存在。
头像更新中,请稍候…
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雪妖
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还有一点,前面我有提到过“一个样品进6针算RSD”和“配制6个平行样品算RSD”,它们两者是具有不同意思的,前者评价的是仪器的紧精密度,而后者则是考察样品的重复性分析问题,后者的意义更大,如果仪器的精密度都不能保正,那做出的结果无任何意义可言。

哈哈,是的,不过不知道为什么楼主觉得“一个样品进6针算RSD”不能很好的显示精密度呢?上个问题好像是这样认为的吧
ruby70303
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原文由 雪妖(czj_1027) 发表:
还有一点,前面我有提到过“一个样品进6针算RSD”和“配制6个平行样品算RSD”,它们两者是具有不同意思的,前者评价的是仪器的紧精密度,而后者则是考察样品的重复性分析问题,后者的意义更大,如果仪器的精密度都不能保正,那做出的结果无任何意义可言。

哈哈,是的,不过不知道为什么楼主觉得“一个样品进6针算RSD”不能很好的显示精密度呢?上个问题好像是这样认为的吧
一般精密度试验需要进几针呀?
xue2009
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还有一点,前面我有提到过“一个样品进6针算RSD”和“配制6个平行样品算RSD”,它们两者是具有不同意思的,前者评价的是仪器的紧精密度,而后者则是考察样品的重复性分析问题,后者的意义更大,如果仪器的精密度都不能保正,那做出的结果无任何意义可言。

哈哈,是的,不过不知道为什么楼主觉得“一个样品进6针算RSD”不能很好的显示精密度呢?上个问题好像是这样认为的吧
一般精密度试验需要进几针呀?

6针就够了
isee
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还有一点,前面我有提到过“一个样品进6针算RSD”和“配制6个平行样品算RSD”,它们两者是具有不同意思的,前者评价的是仪器的紧精密度,而后者则是考察样品的重复性分析问题,后者的意义更大,如果仪器的精密度都不能保正,那做出的结果无任何意义可言。

哈哈,是的,不过不知道为什么楼主觉得“一个样品进6针算RSD”不能很好的显示精密度呢?上个问题好像是这样认为的吧
一般精密度试验需要进几针呀?

6针就够了
那么重复性试验也是需要6个样品就行了吧
xue2009
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还有一点,前面我有提到过“一个样品进6针算RSD”和“配制6个平行样品算RSD”,它们两者是具有不同意思的,前者评价的是仪器的紧精密度,而后者则是考察样品的重复性分析问题,后者的意义更大,如果仪器的精密度都不能保正,那做出的结果无任何意义可言。

哈哈,是的,不过不知道为什么楼主觉得“一个样品进6针算RSD”不能很好的显示精密度呢?上个问题好像是这样认为的吧
一般精密度试验需要进几针呀?

6针就够了
那么重复性试验也是需要6个样品就行了吧

小鸟飞翔
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原文由 xue2009(xue2009) 发表:
      我做了很多的有机碱,做多的情况是用酸性的缓冲液,PH值调到酸性的目的是使N(有机碱一般是含N化合物)结合质子,形成缔合物保留,所以有机碱的存在形式是阳离子。
 
     

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