“System suitability tests are an integral part of gas and liquid chromatographic methods. They are used to verify that the resolution and reproducibility of the chromatographic system are adequate for the analysis to be done. The tests are based upon the concept that the equipment, electronics, analytical operations, and samples to be analyzed constitute an integral system that can be evaluated as such.”
“Unless otherwise specified in the individual monograph, data from five replicate injections of the analyte are used to calculate relative standard deviation (SR) if the requirement is 2.0% or less; data from six replicate injections are used if the relative standard deviation requirement is more than 2.0%.”
2.ICH(The International Conference on Harmonization of Technical Requirements for Registration of Pharmaceuticals for Human Use)是怎么说的?
在章节 ” Q2B: Validation of Analytical Procedures: Methodology” 中, 提到:
“System suitability testing is an integral part of many analytical procedures. The tests are based upon the concept that the equipment, electronics, analytical operations, and samples to be analyzed constitute an integral system that can be evaluated as such. System suitability test parameters to be established for a particular procedure depend upon the type of procedure being validated. See pharmacopeias for additional information.”
基本跟USP说的差不多,也没啥具体的东西。只是ICH也同意,一定要将系统作为整体来测试。
3.FDA(The United States Food and Drug Administration)是怎么说的?
FDA在其指导文件” Guidance for Industry: Bioanalytical Method Validation”中只提到一句:
“System suitability: Based upon the analyte and technique, a specific SOP [standard operating procedure] (or sample) should be identified to ensure optimum operation of the system used.”
也没说怎么做,看来看去,还是USP更加靠谱一些。
4.那我们只能总结方方面面的建议,看看系统适应性可能有哪些方面的要求?
a. 保留时间(retention time)。保留时间是色谱图最直接的参数,同时也是仪器稳定性的表现。我们可以设定一个保留时间的窗口,既能监测保留时间的一致,也能 应对因为色谱柱逐渐老化所引起的保留时间的漂移。
b. 分离度(resolution)。 分离度是表示两个峰分开的情况,也是系统适应性的一个关键指标。一般我们都需要设定一个分离度的下限
c. 响应(response)。如果你是检测痕量样品,那最好将响应这一项作为系统适应性的指标.当然,如果样品浓度很高,或者只要出峰就ok,那就不用这样做了.
d. LOD, LLOQ, and S/N.这几个指标都是看低浓度样品的出峰情况的,也是对于响应的另外一种测试。
e. 塔板数(plate number)。一般来说,分离度和响应指标都能达到,塔板数的意义都不是很大。所以如果要把塔板数放到系统适应性的测试里,在设定指标的时候,不用太严格。不然,很多柱子还能用,你就不得不把他们扔掉了。
f. 拖尾因子(tailing factor)。峰拖尾会影响峰的分离,也是色谱柱老化或者流动相配置是否合适的参考指标。如果你的样品就是比较容易拖尾,而且会影响到分析效果的时候,建议还是将拖尾因子放入系统适应性里。如果你的样品就一两个峰,还离得特远,怎么拖尾都够不着,那就没必要了。
g. 精确度(precision)。一般就是6针重复进样,然后看重复性如何。如果最后计算时用外标的话,精确度是能够保证自动进样器每次都进同样体积的样品,检测器每次都有同样的响应。 如果你用内标计算,一般来说,就不用了。
h. 准确度(accuracy),这是测量值和真实值的接近程度的指标。一般来说,进样品之前,都会先进标样,重新校正标准曲线。
i. 压力(pressure)。许多实验室都有压力要求,系统压力超过设定值就不继续进样了。这样可以减小仪器的磨损,提前预知色谱柱的老化(色谱柱老化,一般也是从压力升高开始的)。 在系统适应性里面加入压力,可以减少在序列运行中,出现系统超压或者色谱柱问题的可能。
j. 空白(blank)。空白可以检查流动相是否干净,确定仪器的残留情况。在不同的情况下,空白可以是基质提取的空白,也可以是某种溶剂或者样品的溶剂。
k. 试运行(priming injection)。一些方法要求在正式开始之前,先进两三针样品,让其保留时间,面积,拖尾等等都达到一个稳定值后,再开始正式进样。
l. 使用质控样品(QC Sample). 在序列运行中加入一些已知浓度的样品,通过用标准曲线去计算这个样品的浓度,并与已知浓度比较。用来检查整个系统的运行是否正常。