主题：【第六届原创】糕点、方便面中姜黄素检测方法-高效液相色谱法

糕点、方便面中姜黄素检测方法-高效液相色谱法
                          唐玉萍
1　范围
本非标方法规定了食品中姜黄素高效液相色谱测定方法。
本非标方法适用于糕点、方便面中姜黄素的含量的测定。

2　规范性引用文件
下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。
GB/T 6682  分析实验室用水规格和试验方法
3　原理
用甲醇提取样品中的姜黄素，经C18柱分离，紫外检测器测定，用保留时间定性，外标法定量。
4　试剂和材料
除非另有说明，所有试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水。
4.1　甲醇：色谱纯。
4.2　乙酸铵溶液（10mmol/L）：称取乙酸铵0.77g，用水溶解，定容到1000ml容量瓶中，经0.45µｍ微孔滤膜过滤（水系）。
4.3　姜黄素标准品：中国药品生物制品检定所提供。
4.4　姜黄素标准储备液：准确称取25mg（精确到0.1mg）姜黄素标准品于25mL容量瓶中，用甲醇（4.1）溶解并定容至刻度，配制成浓度为1mg/mL的标准储备液，于4℃避光保存，有效期12个月。
4.5　姜黄素标准溶液：准确吸取2.5mL姜黄素标准储备液于25mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度，此标准溶液1mL相当于100μg姜黄素标准品，于4℃冰箱内储存，有效期6个月。
5　 仪器和设备
5.1　高效液相色谱仪：配有紫外检测器。
5.2　小型粉碎机。
5.3　超声波提取仪。
5.4　腕式震荡器 。
5.5　分析天平：感量0.0001g。
5.6　高速离心机：5000r/min。
5.7　离心管：聚丙烯，100mL。
5.8　均质机。
5.9　滤膜：再生纤维，25mm，0.20µm。
5.10　滤膜：水系， 0.45µｍ。
5.11　样品瓶：1.5mL，螺纹口。
6　试样的制备和保存
6.1　 试样的制备
将原始样品缩分出500g，取可食部分，经粉碎机粉碎，均分成两份，装入洁净容器内，作为试样。密封，并标明标记。
6.2　试样的保存
将试样于4℃冷藏箱保存。
7　测定步骤
7.1　提取
称取10g（精确到0.01g）试样于离心管（5.7）内，加入50mL甲醇，均质1min。超声提取10min，震荡提取10min，5000r/min离心10min。取上清液用滤膜（5.9）过滤，转移至样品瓶中(5.10)，供液相色谱测定。
7.2　高效液相色谱参考条件
a)    色谱柱：Atlantis C18色谱柱，5µｍ，4.6mm×150mm，或相当者。
b)    柱温：室温。
c)    流动相：10mmol/L乙酸铵溶液：甲醇（80+20，V/V）。
d)    流速：1.0mL/min。梯度洗脱：乙酸铵-甲醇溶液，80：20，保持3分钟，3分钟-7分钟变为：20：80，保持至15分钟，16分钟变回原来的比例：80：20。
e)    检测波长：430nm。
f)    进样量：5μL。
7.3　标准曲线绘制
准确吸取姜黄素标准溶液（4.5）0.2、0.5、1、2、4mL到10mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度。即得2、5、10、20、40µg/mL姜黄素标准系列溶液。以姜黄素的浓度为横坐标，色谱峰面积为纵坐标，绘制标准工作曲线。
7.4　定量测定
本方法采用外标法定量测定。待测样液中姜黄素的响应值应在标准曲线线性范围内，超过线性范围则应对提取液稀释，重新进样分析。
在上述色谱条件下姜黄素液相色谱图参见附录A、附录B。
7.5　定性判定
按照上述条件测定试样和标准工作溶液，试样中的色谱峰保留时间与标准工作溶液应一致（变化范围在±3.0%之内）。
7.6　平行试验
按以上步骤对同一样品进行平行试验测定。
7.7　空白试验
除不加试样外，按上述测定步骤进行。
8　结果计算
8.1　液相色谱测定结果可由计算机按外标法自动计算，也按下列式（1）计算：
X = C× ………………………………………(1)
式中：
X=样品中姜黄色素的含量，单位为克每升（g/kg）；
C=从标准曲线求得测定溶液中姜黄色素的含量，单位为微克每毫升（µg/mL）；
V=样品定容体积，单位为毫升（mL）；
M=样品称样量，单位为克（g）；
所得结果保留至两位有效数字。
9　方法的测定低限、回收率
9.1　测定低限
本方法的测定低限(LOQ)为1.5mg/kg。
9.2　回收率
在添加浓度10-45mg/kg浓度范围内，回收率为92-97%。相对标准偏差为1.8%-4.9%。
10　允许差
在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的15%。

支持原创，谢谢楼主分享

唐老师这这个数据，与高效液相色谱法测定保健食品中姜黄素的含量--《中国卫生检验杂志》2006年02期
（目的:建立保健食品中姜黄素的高效液相色谱测定方法。方法:采用ODS色谱柱,流动相为甲醇∶5%醋酸=65∶35,流速为1.0 m l/m in,检测波长为254 nm,外标法测定姜黄素含量。结果:该方法姜黄素在10.0~100μg/m l浓度范围内线性关系良好,相关系数0.9999;相对标准偏差1.4%;回收率为93.3%~98.4%,最低检出限为0.02μg。结论:本方法操作简便,是保健食品中姜黄素准确而快捷的测定方法。）

相比，数据更让我接近真实。

最常见的干扰是什么？

提取的过程中，若提取不好或者测定糕点中有别的合成色素会干扰。