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主题：【原创】【极限体验】利用Ultimate柱分析某开放ODS柱色谱样品(11月份)

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glucosides
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发表于：2011/11/30 21:38:57 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
该帖子已被samanthalas设置为精华；
【发贴背景】
植物的提取分离，跟通常所说的分离纯化是有一定区别的。通常所说的分离，要求很简单：将不同成分“分离开来”就可以了。植物的提取分离不一样，“分离开来”不是目的，最终的目的，是为了得到“分离开来”的各个流分，是为了得到单体化合物。

【基本过程】
用一张图片来形容一下这个过程，相信很容易看懂的。此贴的主要内容，是描述用Ultimate柱分析某开放ODS柱色谱样品。通过得到的分析结果，来决定这些流分下一步将要采取的分离手段（非唯一）。


由一个流分，变成下面这些流分（这还算少的，呵呵）


【仪器试剂】
水：重蒸水
甲醇：色谱纯，天津大茂       
HPLC：SHIMADZU LC-10AT、SHIMADZU SPD-10A

【色谱条件】 
色谱柱：Ultimate XB-C18柱（5μm, 4.6x250mm）
流动相：甲醇/水（V：V），梯度洗脱
起始浓度：30%；梯度：20min--50%
流速：1.0ml/min
波长：230nm
柱温：柱温箱25度

【实验结果】
特别声明：本实验不是为了将各个峰进行分离，只是为了纯粹地分析，搞清楚其所含有的成分，然后决定下一步的分离手段。所以，有些峰没有分开，这不是我所关心的，我的目的，不是分离，而是单体化合物。这个贴子，是在达到目的的漫漫路途中的一小步而已。

这是第2个流分，依据分析图谱给出的信息，下一步可能采取PHPLC的手段进行分离，对保留时间为5.3min、5.9min（含2个成分）、7.4min处的峰进行累积。5.3min和7.4min处对应的峰，极有可能成为两个单体化合物。


这是第4个流分，其中5.3min、5.9min、7.4min的峰跟第2个流分仍有些交叉，但其主要流分是8.95min和12.14min处对应的峰，下一步将采用PHPLC的方法对其进行分离，不出意外，应该得到至少两个单体化合物。


这是第7个流分，分析结果表明，此样品具有两个主峰（保留时间分别为14.7min和16.1min）。由于众小峰较多，受它们影响，直接采用PHPLC的方法进行纯化是不太现实的。因此决定采用凝胶柱色谱的方法作为下一步纯化的方法，以除去各个小峰再作打算。


【小结与讨论】
1. 不要讨论各个峰没有进行很好地分离，我不需要。很好地分离、分开了又如何？我不是做分析，我要的是单体化合物。这个目的实现不了，什么都是浮云。

2. 有些图跑了20分钟，有些图跑了25分钟。跑了20分钟的，是因为我确信后面没有“东西”了（跟对样品的了解程度有关），再跑也是浪费时间。所以，时间不一。

3. 吸收强度有大有小，当然是因为进样量不一样，吸收强度的大小，我不关心，理由：参考第1条小结与讨论。

4. 其它该讨论的，在贴子中讨论得差不多了。

5. 如果有疑问，或者想要了解什么内容，请回贴。
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glucosides
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2011/11/30 21:39:25 沙发 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
沙发占了，有用。
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冷冷的冰雨
xy4585618
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2011/12/1 8:05:44 板凳 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
赶上末班车了
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冷冷的冰雨
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2011/12/1 8:12:24 马扎 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
楼主说：有些图跑了20分钟，有些图跑了25分钟。跑了20分钟的，是因为我确信后面没有“东西”了（跟对样品的了解程度有关），再跑也是浪费时间。所以，时间不一。
你可以在走完20分钟后用高浓度的有机溶剂再走上5分钟就知道后面有没有东西了，附上图谱更有说服力
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2011/12/1 8:12:53 Last edit by xy4585618
冷冷的冰雨
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2011/12/1 8:17:34 地毯 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
1. 不要讨论各个峰没有进行很好地分离，我不需要。很好地分离、分开了又如何？我不是做分析，我要的是单体化合物。这个目的实现不了，什么都是浮云。

峰分离不好有可能是峰中有峰，这样就需要做一下光谱进行确认，分离不好的峰是不是单一成分，如果不是，峰分离的分离好坏对于得到到是否为单体化合物是有影响的。
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2011/12/1 9:22:12 地板 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 冷冷的冰雨(xy4585618) 发表:
楼主说：有些图跑了20分钟，有些图跑了25分钟。跑了20分钟的，是因为我确信后面没有“东西”了（跟对样品的了解程度有关），再跑也是浪费时间。所以，时间不一。
你可以在走完20分钟后用高浓度的有机溶剂再走上5分钟就知道后面有没有东西了，附上图谱更有说服力


NO，我不会做这种麻烦事的
事实上，我只要自己心里有数就行了
不需要证明给别人看啊，毕竟要分单体的是我
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glucosides
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2011/12/1 9:24:13 6楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 冷冷的冰雨(xy4585618) 发表:
1. 不要讨论各个峰没有进行很好地分离，我不需要。很好地分离、分开了又如何？我不是做分析，我要的是单体化合物。这个目的实现不了，什么都是浮云。

峰分离不好有可能是峰中有峰，这样就需要做一下光谱进行确认，分离不好的峰是不是单一成分，如果不是，峰分离的分离好坏对于得到到是否为单体化合物是有影响的。


这当然，光凭一个单一峰形，很明显不能判断是不是单一物质
光谱的事，是后续实验的事，别说光谱了，经过光谱确认的，也未必就是单一物质
这样的情况，太常见了。此贴只是分析，是漫长路途中的一小步。
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glucosides
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2011/12/1 9:25:03 7楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 冷冷的冰雨(xy4585618) 发表:
赶上末班车了

什么时候出数据就什么时候发贴啊
反正资品是累积的，无所谓先后了
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冷冷的冰雨
xy4585618
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2011/12/1 9:33:52 8楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 glucosides(glucosides) 发表:
原文由 冷冷的冰雨(xy4585618) 发表:
楼主说：有些图跑了20分钟，有些图跑了25分钟。跑了20分钟的，是因为我确信后面没有“东西”了（跟对样品的了解程度有关），再跑也是浪费时间。所以，时间不一。
你可以在走完20分钟后用高浓度的有机溶剂再走上5分钟就知道后面有没有东西了，附上图谱更有说服力


NO，我不会做这种麻烦事的
事实上，我只要自己心里有数就行了
不需要证明给别人看啊，毕竟要分单体的是我

楼主太自信了！
你按照我说的去做，20min中后肯定还有峰，不信你试试
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samanthalas
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2011/12/1 9:55:31 9楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
ODS开放柱是怎么做的啊？你怎么知道某个流分出来了，该去接了啊？
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samanthalas
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2011/12/1 9:56:15 10楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
居然流分4里面还有流分2的东西，看来开放柱相当不准确了！
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