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液相色谱分析是指流动相为液体的色谱技术,是色谱法中最古老的一种,但通过改进填料的粒度及柱压,在经典的
液相柱色谱的基础上引入了
气相色谱的塔板理论,在技术上采用了高压输液泵,高效固定相和高灵敏度的检测器,实现了分析速度快.分离效率高和操作自动化,这种色谱技术被称为高效
液相色谱法(HighperformanceliquidchromatographyHPLC).中药的成分非常复杂,以往常用的薄层色谱等方法因其精密度.准确度.灵敏度.重现性差而不能满足现代中药的需要.高效
液相色谱正是以其稳定.可靠.高效的特点成为中药研究的最重要的分析方法.目前高效
液相色谱已经广泛应用于生物碱.皂苷.黄酮.蒽醌.香豆素等各种中药有效成分的测定.近年来对高效
液相色谱监测中药的研究非常多,由于高效
液相色谱集经典
液相色谱和
气相色谱的优势于一身,无论柱效.选择性还是分析程度都达到或超过了它们,近年来对高效
液相色谱的不足之处进行了改进,使这项技术日臻完善.
高效
液相色谱法有“三高一广一快”的特点: ①高压:流动相为液体,流经色谱柱时,受到的阻力较大,为了能迅速通过色谱柱,必须对载液加高压。 ②高效:分离效能高。可选择固定相和流动相以达到最佳分离效果,比工业精馏塔和
气相色谱的分离效能高出许多倍。 ③高灵敏度:紫外检测器可达0.01ng,进样量在μL数量级。 ④应用范围广:百分之七十以上的有机化合物可用高效
液相色谱分析,特别是高沸点、大分子、强极性、热稳定性差化合物的分离分析,显示出优势。 ⑤分析速度快、载液流速快:较经典液体色谱法速度快得多,通常分析一个样品在15~30分钟,有些样品甚至在5分钟内即可完成,一般小于1小时。 此外高效
液相色谱还有色谱柱可反复使用、样品不被破坏、易回收等优点,但也有缺点,与
气相色谱相比各有所长,相互补充。高效
液相色谱的缺点是有“柱外效应”。在从进样到检测器之间,除了柱子以外的任何死空间(进样器、柱接头、连接管和检测池等)中,如果流动相的流型有变化,被分离物质的任何扩散和滞留都会显著地导致色谱峰的加宽,柱效率降低。高效
液相色谱检测器的灵敏度不及
气相色谱。