原文由 tiantaishan(tiantaishan) 发表:
使用氨基酸分析包,做标样两平行,衍生后,每个样品重复进样4次,第一个样品前3次保留时间都不稳定,面积误差也较大(特别是保留时间长的峰),第二个样也重复4次,保留时间和峰面积重复性均较好。估计是三乙胺吸附和异硫氰酸苯酯影响。
有个问题就是,三乙胺能否换为氨水和氯化铵的缓冲溶液,衍生后,正己烷萃取增为两次,除去(异硫氰酸苯酯,杂质)效果是否更好些?取200微升加水800微升是否可以换为800微升流动相A??
非常抱歉tiantianshan,我出差到了一个居然没有wifi的地方,不像是21世纪呀,
以下建议,希望能对您有帮助哦
保留时间不稳定可能是用于分离的色谱柱没平衡好造成,与三乙胺和异硫氰酸苯酯没关系。
色谱柱使用前可使用100%的流动相B先以1ml/min的流速冲洗15min后用流动相A平衡。
三乙胺不能换为氨水和氯化铵的缓冲溶液,因为即使多萃取几次也不能完全去除异硫氰酸苯酯,如果缓冲溶液含有氨水和氯化铵,那么进样后,铵离子会不断与样品中残留的异硫氰酸苯酯发生反应,反应产生的产物可能干扰测定。取200微升加水800微升应该可以换为800微升流动相A。加水稀释的目的是为了降低样品中的有机溶剂浓度,减少溶剂效应,防止先被洗脱的门冬氨酸和谷氨酸峰分叉,同时提高两个氨基酸峰的检出灵敏度,仅此目的而已。如果进2ul样品溶液不会出现门冬氨酸和谷氨酸峰出现分叉的现象的话,也可以不稀释。
不用谢谢我了,我已经晚回复您的问题了,
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