主题：【原创】“色”路蹒跚，证得正果，某品种含量测定方法学部分

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发表于：2013/06/21 14:13:56 楼主管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

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继“投石问路----记一次流动相的摸索”后，这篇是后续的研究部分。

项目：含量测定（3.2.P.5.2.7）

检查方法：照高效液相色谱法（中国药典2010年版二部附录Ⅴ D）测定

试验条件：

色谱柱（柱长：150mm，内径：4.6mm，填料：C₁₈，填料粒径：5μm ，SN：W11212195）

UV检测器（检测波长：295nm）

柱温：室温

流动相：取醋酸铵3.96g,加水720ml使溶解，加乙腈280ml、三乙胺10ml，用冰醋酸调节pH值至5.5为流动相

流速：1.0ml/min

运行时间：约20分钟

系统适用性：去氟帕罗西汀峰、盐酸帕罗西汀峰、N-甲基帕罗西汀峰，理论板数按盐酸帕罗西汀峰计算不低于3000,盐酸帕罗西汀峰、去氟帕罗西汀峰与 N-甲基帕罗西汀峰之间的分离度均应符合要求。

具体试验操作：取本品10片，精密称定，研细，精密称取适量（约相当于帕罗西汀10mg)，用流动相溶解并稀释制成每 lml中约含0.lmg的溶液，摇匀，滤过，精密量取续滤液20μl注人液相色谱仪，记录色谱图；另取盐酸帕罗西汀对照品，同法测定，按外标法以峰面积计算，即得。

计算公式：

标示量百分含量（%）=××100%

式中：C_s为对照品的浓度（mg/ml）；

A_t为供试液的主峰面积；

N_t为供试液的稀释倍数；

A_S为对照品溶液的主峰面积；

W为供试品取样量（mg）。

3.2.P.5.3.5.2流动相选择(色谱图见附件941～955)

参照中国药典2010年版二部收载的盐酸帕罗西汀片质量标准中含量测定项, 取醋酸铵3.96g,加水720ml使溶解，加乙腈280ml、三乙胺10ml，用冰醋酸调节pH值至5.5为流动相。

（1）、试验方法与具体步骤：

精密称取盐酸帕罗西汀对照品23.0mg、去氟帕罗西汀对照品5.25mg、N-甲基帕罗西汀对照品5.41mg，同置10ml量瓶中，加流动相适量超声使溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过，作为系统适用性试验供试液1；

精密称取盐酸帕罗西汀对照品10.2mg，置100ml量瓶中，加流动相适量超声使溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过，作为系统适用性试验供试液2。

分别精密量取以上供试液20μl注入液相色谱仪记录色谱图。

（2）、试验结果见下表图。

以上试验结果表明，以取醋酸铵3.96g,加水720ml使溶解，加乙腈280ml、三乙胺10ml，用冰醋酸调节pH值至5.5为流动相，盐酸帕罗西汀与去氟帕罗西汀和N-甲基帕罗西汀均能有效分离，各峰理论板数均大于3000，适合含量测定。

3.2.P.5.3.5.3进样精密度试验(色谱图见附件956～961)

精密称取盐酸帕罗西汀对照品10.4mg，置100ml量瓶中，加流动相适量超声使溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为供试液，精密量取供试液20μl注入液相色谱仪，记录色谱图，重复操作6次，试验结果见下表。

复性试验要求。

3.2.P.5.3.5.8含量测定方法的确定

根据含量方法学试验结果并参照中国药典2010年版二部收载的盐酸帕罗西汀原料药和制剂质量标准含量项，确定本品含量测定方法如下：

照高效液相色谱法（中国药典2010年版二部附录Ⅴ D）测定。

色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；取醋酸铵3.96g,加水720ml使溶解，加乙腈280ml、三乙胺10ml，用冰醋酸调节pH值至5.5为流动相；检测波长为295nm。分别取盐酸帕罗西汀、去氟帕罗两汀与N-甲基帕罗西汀对照品各5mg，置同一10ml量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，作为系统适用性试验溶液，取20μl注人液相色谱仪，记录色谱图，出峰顺序为去氟帕罗西汀峰、盐酸帕罗西汀峰、N-甲基帕罗西汀峰，理论板数按盐酸帕罗西汀峰计算不低于3000,盐酸帕罗西汀峰、去氟帕罗西汀峰与 N-甲基帕罗西汀峰之间的分离度均应符合要求。

测定法取本品10片，精密称定，研细，精密称取适量（约相当于帕罗西汀10mg)，用流动相溶解并稀释制成每 lml中约含0.lmg的溶液，摇匀，滤过，精密量取续滤液20μl注人液相色谱仪，记录色谱图；另取盐酸帕罗西汀对照品，同法测定，按外标法以峰面积计算，即得。

3.2.P.5.3.5.9含量测定色谱条件耐用性

因本品含量测定色谱条件参照中国药典2010年版二部收载的盐酸帕罗西汀原料药和制剂质量标准含量项，未进行相关研究。