主题:【求助】出峰面积不重复

浏览0 回复17 电梯直达
wy20071722
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昨天做实验,用Beckman 的LIF检测器检测荧光标记的DNA,峰面积不重复,相差很大,迁移时间很重复,不知道为什么?

我自己考虑可能有:样品的问题;配样的问题;进样的问题;检测的问题。

我用相同的样品不换样进样峰面积也不重复,这应该排除了配样的问题?

荧光样品淬灭不会那么快吧?两针的时间应该是没问题的吧?

其他的原因就不知道了,现在还没找到原因,求大家帮忙!
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原文由 wy20071722(wy20071722) 发表:
昨天做实验,用Beckman 的LIF检测器检测荧光标记的DNA,峰面积不重复,相差很大,迁移时间很重复,不知道为什么?

我自己考虑可能有:样品的问题;配样的问题;进样的问题;检测的问题。

我用相同的样品不换样进样峰面积也不重复,这应该排除了配样的问题?

荧光样品淬灭不会那么快吧?两针的时间应该是没问题的吧?

其他的原因就不知道了,现在还没找到原因,求大家帮忙!


路过,我也常遇到这问题。求解释。
beyond1977
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你的问题是偶然还是一直这样,偶然的话应该算正常的,我们这也会,我怀疑多半是进样量造成的,毕竟进样压力小,时间短
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wy20071722
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原文由 beyond1977(xsh6743) 发表:

你的问题是偶然还是一直这样,偶然的话应该算正常的,我们这也会,我怀疑多半是进样量造成的,毕竟进样压力小,时间短


我已经有两个月没做实验了,以前不这样的。进样用的是0.5psi,0.5s,不知道什么问题。这个一定要解决的,不然没法做实验。如果要排除其他可能性有没有什么比较好的办法?
wy20071722
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原文由 beyond1977(xsh6743) 发表:

你的问题是偶然还是一直这样,偶然的话应该算正常的,我们这也会,我怀疑多半是进样量造成的,毕竟进样压力小,时间短


不是偶然这样的。
nini2006
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不知你用什么模式分离。一般情况下DNA吸附严重,如果有吸附现象,重现性肯定不好。
beyond1977
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你的问题是偶然还是一直这样,偶然的话应该算正常的,我们这也会,我怀疑多半是进样量造成的,毕竟进样压力小,时间短


我已经有两个月没做实验了,以前不这样的。进样用的是0.5psi,0.5s,不知道什么问题。这个一定要解决的,不然没法做实验。如果要排除其他可能性有没有什么比较好的办法?


进样时间0.5秒会不会太短了,你试着增大点看看
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nini2006
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你的问题是偶然还是一直这样,偶然的话应该算正常的,我们这也会,我怀疑多半是进样量造成的,毕竟进样压力小,时间短


我已经有两个月没做实验了,以前不这样的。进样用的是0.5psi,0.5s,不知道什么问题。这个一定要解决的,不然没法做实验。如果要排除其他可能性有没有什么比较好的办法?


进样时间0.5秒会不会太短了,你试着增大点看看
0.5秒是有点太短了。量太少误差就大。
wy20071722
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你的问题是偶然还是一直这样,偶然的话应该算正常的,我们这也会,我怀疑多半是进样量造成的,毕竟进样压力小,时间短


我已经有两个月没做实验了,以前不这样的。进样用的是0.5psi,0.5s,不知道什么问题。这个一定要解决的,不然没法做实验。如果要排除其他可能性有没有什么比较好的办法?


进样时间0.5秒会不会太短了,你试着增大点看看


谢谢!我一会试试吧,现在晚上十点了,我还在琢磨这个问题。白天问了工程师,他也说可能是进样的问题。我现在换成紫外的,貌似峰面积又挺重复的了。
ericwong
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wy20071722
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原文由 nini2006(nini2006) 发表:

不知你用什么模式分离。一般情况下DNA吸附严重,如果有吸附现象,重现性肯定不好。


是的,我刚开始两针之间只用缓冲液冲洗,两针之间峰面积差距非常大,后来加上NaOH冲、水冲就好了很多。看来这东西不能省。

现在的问题是我加上了这些以后峰面积重复性仍然是不理想的,两针之间的峰高能差到10 RFU。
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