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直奔主题吧,先晒出亮点:
1.QuEChERS方法简单快捷
2.本次实验采用两种QuEChERS 的spe试剂盒提取(一种是普通的QuEChERS,一种是含有gcb的QuEChERS),观察回收率
3.本次实验使用761前处理,用了三个品牌公司的spe柱,对比回收率
4.
液相条件11种氨基甲酸酯在10分钟内全部出峰,11种药分离10个峰(可能有版友做得更好的,莫笑)
5.楼主每次都会带来一些新奇的玩意,你见过ufo般的固相萃取吗?敬请关注!
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刚到货,先验货再说
这个是粉包
spe试剂盒
一、QuEChERS前处理方法
1. 称取10g的样品,由于色素最深的枸杞被拿了,现在只好拿西洋菜了
2. 加入标准品(浓度详见数据整理部分)
.
3.用量筒加入色谱纯乙腈10ml,紧记,在做QuEChERS前,乙腈最好先放入冰柜里冰冻起来,因为加入粉包的时候离心管会发热
4.匀浆机匀浆
匀浆前先准备一缸大清水下图2L的烧杯装的是清水,一小杯分析纯的乙腈,下图中2L烧杯旁就是乙腈,一卷纸巾
清水用了清洗刀头,分析纯乙腈用来清洗刀头防止加标样品污染
5.匀浆结束后,往每个离心管里加入一个陶瓷颗粒,然后把粉包里的粉尽量完全倒入离心管里
陶瓷颗粒有助于粉包里的粉和样品能打成一片
加完粉包,那个时候离心管开始发烫了
6.盖上盖子,用手猛烈震荡完后,怕再不均匀用漩涡震荡器震动
7.离心5min
8.吸取上清液到另一根装有分散式spe试剂盒里
白色是普通的,黑色那种是含有gcb的
吸取3ml上清液到管里
然后又猛烈的震动1min
9.再次离心,吸取1ml上清液到样品瓶中
10看了还是含gcb的比普通的颜色要清一点。
颜色深一点的是普通的,颜色浅一点是含有gcb的
11. 35℃吹近干,用初始流动相定容1ml上机
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小小结:
最后定容,算好是1:1上机无稀释倍数
秤样10g,加入10ml乙腈,为了spe试剂盒有足够的样品过滤出,so楼主吸取3ml,经剧烈震荡1min后,离心,吸出1ml样品吹近干,定容上机。
(回收率等详见数据处理部分)
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二、761前处理
1.称样还是10g
2.加入20ml乙腈
因为只是761的方法,用分析纯的乙腈即可
3.还是匀浆
匀浆前。还是和
QuEChERS的匀浆方法一样!
匀浆后
匀浆后加氯化钠就可以离心了,以前不匀浆偷懒用振荡器震半个小时代替匀浆,经过实验比对过,发现匀浆以后的回收率会比震荡过的要好!
4.加氯化钠,离心5min
注意,楼主试过先加氯化钠再加乙腈(此法不选择匀浆,而用震荡代替匀浆),这样回收率不如先加乙腈再加氯化钠的好,为了能出一份准确的报告还是别图方便!
离心5min
5.吸出上清液,每根试管里吸取4ml,35℃氮吹近干
1)为什么要近干?
全干会影响回收率
有时候吹得死干的话,加入1+99(甲醇+二氯甲烷)不能完全把壁上的东西洗脱下来
6.用3ml1+99的甲醇+二氯甲烷定容,漩涡震荡
仔细看看,液体漩涡的时候,壁上的东西完全被洗脱下来
7.过spe柱
最后一亮点出现了!注意罗,ufo来了
1)我们先吧接受样品的试管放到缸里面!
先打开上面的盖子,把试管晒进去,这个固相萃取一共24个孔
但是必须要先想好自己想要的顺序才放哦。因为这个固相萃取不像普通的那种那样洗完柱子以后再放试管架的。这个一部搞定的
缸里白色的那个圆盘很重要的哦!活化柱子的废液就看他了
2)然后把上面的盖子盖上去,把要用的spe柱子放好。
注意哦,第一如果上面没放好的话是盖不紧了,一定要卡到位
第二,我们第一步是洗柱子,so我们要把缸移到waste那里,留意下图中红色的圈圈。其中白色那个点点有指示作用!
第三,如果盖上盖子以后指示的那点点不在waste那里,我们可以双手掌顶着旁边两个紫色圈圈中白色的地方,手指轻轻的一运劲一提起,一移就可以移到waste的状态
第四,当我们开始收集样品的时候,把他转到collect就可以了。
最重要一点就是,如果样品好过不需要用到色魔的泵的时候,记得把废液缸放地上,否则废液难以流入废液缸中!
3)过完柱的效果
8. 40℃吹置近干,初始流动相定容2ml,上机!
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小小结:此方法也是1:1上机,无稀释倍数
10g样品,20ml乙腈,从中取4ml,最后定容到2ml
(回收率等详见数据处理部分)
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三、数据处理:
----------------------------(数据处理有点多了,星期一见)
= =!
对了,楼主已经计算好,最后还是1:1上机,没有稀释倍数!
下班前送上MRM图
1ppb
1ppb 色谱柱是Atlantis t3柱
如果要优化
液相条件看来要拖更长的时间
同一流动相,个人感觉还是Poroshell 120的色谱柱出峰比好而且峰分出来比较多!
两种QuEChERS的空白
下图可见含GCB的QuEChERS空白要比普通的干净一点
三种spe柱的空白
总的来说,s家的柱子过滤得没前两家的干净
加标2ppb的图
加标样品2ppb的图
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小结:
加了gcb的QuEChERS比普通的回收率偏低了,但是对于色素深的样品如果不用加gcb的话对质谱还是没那么好!
spe环节里,个人感觉还是a家的spe柱不错!
涕灭威砜和涕灭威亚砜这两种药很奇怪,出来的数据竟然是一模一样的,不知道其他版友是怎么样的呢?
涕灭威这药很奇怪,回收率不怎么好,其他版友又做得怎么样呢?
不过总的来说,
QuEChERS的方法符合标准要求的回收率。而且这玩意刚开始接触没多久,前处理用用功回收率肯定还会提高,spe柱的回收率是好,但是时间太长。
QuEChERS也是往后发展的一个方向!
欢迎留言讨论!
楼主还发现一个严重的问题,只要那些样品一过膜,回收率就会降低一大截,有没有版友遇到这种情况?
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ps:此次实验里含有大量某家公司的产品,这并无广告之意,对于楼主来说,新奇有趣的楼主都会去试验!
--------------------------几天以后
自己找亮点。。。。。。。。。。