花生中黄曲霉毒素的检测
黄曲霉毒素是由黄曲霉、寄生曲霉产生的一类高毒性代谢物,它们生长在土壤中并通过直接接触转移到天然产品中。自黄曲霉毒素被认定为是一种强致癌物质起,欧盟就规定了最大限量。本文采用高效液相色谱法测定花生中的黄曲霉毒素B1、B2、G1和G2,采用了柱后衍生法测定,灵敏度高,结果理想。
检测依据:GB/T18979-2003 ;
液相色谱仪:LC-10AVP
色谱条件:色谱柱:色谱柱:Welchrom-C18 ( 250 mm ×4.6 mm 5μ ); Serial Number:W13212257;流动相:水:甲醇=55:45;流速:1mL/min。荧光检测器:激发光波长:360nm 发射光波长:450nm 增益:17;柱温:30℃;衍生方式:柱后光化学衍生(254nm)进样量:10uL混合对照品溶液的配置: 精密量取黄曲霉毒素混合标准品溶液0.5ml于10ml容量瓶中,用甲醇定容,为储备液,精密量取该储备液适量,分别制成不同浓度的混标溶液;供试品溶液的配置:称取粉碎花生试样约15g ,加人氯化钠3g ,置于均质瓶中,用70%甲醇溶液定容至125ml,高速搅拌2分钟(搅拌速度大于11 000转/分钟),离心5 分钟( 离心速度2500 转/ 分钟) , 精密量取上清液15ml,用水定容至50mL,用微孔滤膜(0.45μm)滤过,量取此滤液10.0ml,通过免疫亲合柱(Welchrom®Aflatoxin G1 G2 B1 B2 货号:01140-00031 ),流速每分钟3ml,用水20ml洗脱,洗脱液弃去,使空气进入柱子,将水挤出柱子,再用适量甲醇洗脱,收集洗脱液,置2ml容量瓶中,甲醇定容,过滤后进液相色谱分析。定容体积为:125mL; 稀释用样品滤液体积:15mL;定容至50mL;过免疫亲合柱滤液体积:10mL,甲醇洗脱液体积;2mL。
工作曲线系列B1、B2、G1、G2混标使用液浓度:0、2、4、8。5、10、21ng/mL。
2ng/mL混标分离色谱图:
20ng/mL混标液分离色谱图:
G2、G1、B1、B2工作曲线线性:
花生样品的检测色谱图:
平行试验:
表1 加标回收率测定结果样品名称 | 原始含量(ng/g) | 加标含量(ng/g) | 检测量(ng/g) | 回收率(%) |
黄曲霉毒素G2 | / | 20 | 18.48 | 92.4 |
黄曲霉毒素G1 | / | 20 | 18.72 | 93.6 |
黄曲霉毒素B1 | 4.3 | 20 | 23.58 | 96.4 |
黄曲霉毒素B2 | 1.43 | 20 | 19.67 | 91.2 |
结论:综合以上的分析结果可知,该花生样品G2、G1未检出,检出B2的量为:(0。252+0。258)/2*2/(15/125*15/50*10)=1。43ug/kg;检出B1的量为:(0。796+0。746)/2*2/(15/125*15/50*10)=4。3ug/kg,合格,可以放心食用。