在“
液相色谱”论坛中看见有网友在讨论延迟体积是什么?并且有些什么影响?
在这里,就我的理解给大家一个参考。
延迟体积主要是指从泵出来之后到进入色谱柱之前这一段流路的体积,这一段流路中最大的体积来自于混合器,混合器的大小主要决定了延迟体积的大小。
那么,问题来了,这部分体积对分析的影响表现在什么地方呢?
如同“zyulcl”所说,对于等度分析而言是没有影响的,但在梯度分析时影响就能显现出来。
首先,我们来看下图,这是理论梯度和真实梯度的区别,也叫梯度追随性。
因为延迟体积的存在,我们可以设想为流动相在这部分体积中会进行一个再混合的过程(类似于样品在塌陷的柱头处扩散),这样真实梯度就会表现为梯度按曲线变化(如上部的色谱图);当仪器的延迟体积变小时,真实梯度会逐渐向理论梯度靠近(如下部的色谱图)。
那么,这种梯度追随性的差异会对分析工作带来什么影响呢?
首先,因不同仪器的延迟体积不同,导致相同梯度设定下,达到某一特定混合比例的时间不同(在X仪器上达到A:B=40:60,在3min;在Y仪器上达到A:B=40:60,在3.2min)。
其次,拿上图举例,上部色谱图显示的仪器,达到90%B相的时间段非常短;下部色谱图显示的仪器,达到90%B相的时间段就更接近于理论梯度。对于这一极性流动相下样品的洗脱时间就更长。
最后,我们看下图,一般在梯度分析的末尾,我们都需要把流动相切换成梯度起始时的配比,而延迟体积更大的仪器,需要更多的回冲时间,从而影响分析效率。同理,延迟体积小的仪器更能提高分析效率,这一点在以3-5min为一分析周期的
LCMS分析中更加明显。
以上是我关于延迟体积对
液相分析影响的一些认识,欢迎大家斧正和讨论。