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主题：【第十届原创】HPLC分析方法开发关键参数-化合物pka和流动相pH

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牛一牛
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发表于：2017/08/01 14:00:18 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
维权声明：本文为v2700892原创作品，本作者与仪器信息网是该作品合法使用者，该作品暂不对外授权转载。其他任何网站、组织、单位或个人等将该作品在本站以外的任何媒体任何形式出现均属侵权违法行为，我们将追究法律责任。
因为在一起工作相处的时间比较久了，所以偶尔就有同仁问到让我很难解释清楚的问题，针对HPLC方面的比较多的是：你为什么用这个流动相，你怎么知道就一定要调节pH到3.5或2.5，诸如此类的问题，一句话两句话还真的难以解释清楚，想解释，但难于表达，还是以文字的形式表述更清晰。
在药物分析这一块，化学药，平时接触到的绝大部分是弱酸性或弱碱性的药物。
路易斯酸碱理论，大家都懂，Herderson-Halselbalch公式也许并不陌生，本人习惯称之为“H-H公式“，表述为：

先撇开化学方面的因素，从数学方面入手，对于一个弱酸，当pH高于或低于pKa两个单位时，化合物99%以一种形式存在。
反相色谱，简言之即流动相极性大于固定相极性的色谱，对于可电离的化合物，要想获得强的反相保留，尽可能不电离，因为化合物一旦电子，极性会变大，不电离时极性最小，极性小，在反相色谱柱上保留就强。对于HPLC分析方法开发，对反相色谱而言，化合物有保留是前提。
比如，一个弱酸性化合物，pKa为5.0，那么，当流动相（缓冲液）pH调节为3.0时，99%的化合物是以弱酸形式存在的，即HA形式，此时，化合物极性相对较小，保留较强；另一方面，对于HPLC来讲，以一种形式存在的化合物，可以获得较好的尖锐的峰。
对于为什么选择某一种缓冲体系，其实还是根据化合物本身的pKa而定。
缓冲体系，简单分，三类：
弱碱及其对应的盐，如NH3-NH4CL;
弱酸及其对应的盐，如HAc-NaAc；
多元弱酸的酸式盐及其对应的次级盐，如K2HPO3-K3PO3。
工作中，常用的缓冲盐，绝大部分为磷酸盐或醋酸盐，这就限定了流动相的组成。举例，一个弱酸性化合物，pKa为5.0，可以选择磷酸盐体系，然后用磷酸调节pH至3.0即可，大局就定了。
说了这么一大串，最关键的参数依然是pKa,这个参数在HPLC分析方法开发中有着举足轻重的地位。
以上仅为个人总结观点，愿对各位坛友有所帮助。
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Kevin
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2017/8/2 14:00:34 沙发 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
感谢牛老师无私分享~~~~
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牛一牛
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2017/8/2 14:41:29 板凳 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 Kevin(m3163882) 发表:
感谢牛老师无私分享~~~~
分享后就不用回复私信了，人懒。
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joysdick
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2017/8/25 10:57:09 马扎 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
知道会用pKa来开发方法，基本上是有一定经验的了，但只是第一步，流动相pH选择和pKa有什么联系，对于多个pKa或者同时具有多个酸碱中心，该怎么选择pH缓冲盐种类，不同的缓冲盐对应的最佳PH缓冲范围，碱性化合物怎么应对，再进一步的离液试剂，离子对试剂，色谱柱碳链长度，固定相杂化种类……pKa是打开方法开发大门的钥匙，另外文中说到99%化合物以弱酸形式存在，可能只是对于楼主平日工作所接触到的而言，其实更多的是弱碱或者同时有酸碱性的化合物
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云雀
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2017/11/17 20:38:27 地毯 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 joysdick(joysdick) 发表:
知道会用pKa来开发方法，基本上是有一定经验的了，但只是第一步，流动相pH选择和pKa有什么联系，对于多个pKa或者同时具有多个酸碱中心，该怎么选择pH缓冲盐种类，不同的缓冲盐对应的最佳PH缓冲范围，碱性化合物怎么应对，再进一步的离液试剂，离子对试剂，色谱柱碳链长度，固定相杂化种类……pKa是打开方法开发大门的钥匙，另外文中说到99%化合物以弱酸形式存在，可能只是对于楼主平日工作所接触到的而言，其实更多的是弱碱或者同时有酸碱性的化合物
欢迎分享工作中的心得体会~
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云雀
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2017/11/17 20:40:19 地板 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
pKa对于药物研发确实太重要了，不仅分析方法开发要用，溶出介质选择要用，制剂处方筛选有时也要考虑
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牛一牛
v2700892
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2017/11/18 12:32:23 6楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 joysdick(joysdick) 发表:
知道会用pKa来开发方法，基本上是有一定经验的了，但只是第一步，流动相pH选择和pKa有什么联系，对于多个pKa或者同时具有多个酸碱中心，该怎么选择pH缓冲盐种类，不同的缓冲盐对应的最佳PH缓冲范围，碱性化合物怎么应对，再进一步的离液试剂，离子对试剂，色谱柱碳链长度，固定相杂化种类……pKa是打开方法开发大门的钥匙，另外文中说到99%化合物以弱酸形式存在，可能只是对于楼主平日工作所接触到的而言，其实更多的是弱碱或者同时有酸碱性的化合物


药物分析版面需要你强有力的支持，
请多多发言，分享是一种美德。
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工大色谱中心
v3065744
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2017/11/22 13:09:24 7楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
从分析方法开发这块来看，我更想知道的是流动相梯度的设定，这方面有什么技巧可以探讨下吗？
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花琦日夏
v3100361
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2018/4/26 10:44:15 8楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
牛老师，您好，如果化合物存在两个pKa，高效液相法分析该化合物时流动相的pH该如何选择？
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Insp_208ad154
Insp_208ad154
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2018/4/27 15:25:14 9楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
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牛一牛
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2018/4/29 13:40:56 10楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由花琦日夏(v3100361)发表:牛老师，您好，如果化合物存在两个pKa，高效液相法分析该化合物时流动相的pH该如何选择？
那就是二元弱酸或弱碱了，原则还是抑制解离，一样的道理。
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手机版： HPLC分析方法开发关键参数-化合物pka和流动相pH
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