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凝胶色谱（GPC）

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主题：【讨论】SEC检测PEG分子量

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Young008

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发表于：2017/10/24 17:07:11 楼主管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

最近用SEC测PEG分子量，检测条件-流动相：0.1M硝酸钠水溶液流速：1ml/min 柱温：40℃ 检测器：示差检测器进样浓度：2mg/ml 进样体积：100微升。样品分子量20K左右，现在情况是样品峰和二聚物（40K）的分离不好，领导要求基线分离，请问各位大神条件怎么优化。柱子用的是SB-800 HQ系列（803，804）串联

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2017/10/25 13:40:44 沙发管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

型号排阻限(支链淀粉) NTP* 型号排阻限（PEG）（支链淀粉） NTP*
SB-802 HQ 4*103 >12000 SB-2002 4*108 >9000
SB-802.5 HQ 1*104 >16000 SB-2002.5 1*104 >12000
SB-803 HQ 1*105 >16000 SB-2003 1*105 >12000
SB-804 HQ 1*106 >16000 SB-2004 1*106 >12000
SB-805 HQ 4*106 >12000 SB-2005 4*106 >12000
SB-806 HQ （2*107） >12000 SB-2006 （2*107） >12000
SB-806M HQ （2*107） >12000 SB-2006M （2*107） >12000
SB-G SB-800 HQ系列保护柱 SB-LG SB-2000 HQ系列保护柱

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小不董

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2017/10/25 13:42:40 板凳管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

根据其色谱柱信息和你样品的特性，目标物的分子量相对柱子偏小，使用分离分子量更小的会好些。

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Young008

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2017/10/25 13:57:51 马扎管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

原文由 小不董(doxw0323) 发表:
根据其色谱柱信息和你样品的特性，目标物的分子量相对柱子偏小，使用分离分子量更小的会好些。

谢谢大神的回答。那（1）如果不换柱子应该从哪些方面优化（2）如果要换的话，有没有推荐的柱子（3）领导现在想DMF做流动相，因为叠氮化钠比较麻烦，如果换DMF有什需要注意的，管线有啥要求没？，求解答

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小不董

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2017/10/26 7:44:47 地毯管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

原文由 Young008(v3105897) 发表:
谢谢大神的回答。那（1）如果不换柱子应该从哪些方面优化（2）如果要换的话，有没有推荐的柱子（3）领导现在想DMF做流动相，因为叠氮化钠比较麻烦，如果换DMF有什需要注意的，管线有啥要求没？，求解答

PEG是可以用DMF也可以用水相测试，居然你有水性柱，再买个能测定更低分子量的色谱柱就好了。叠氮化钠是难买些，但买了一瓶可以用很久的，如果你能保证经常更换水，不让他张菌也可以。也有加一定比率的甲醇来抑制细菌的。
但如果你要使用DMF测定，那就要更换柱子，更换成有机相色谱柱，还要能耐DMF的柱子。DMF的粘度很大，而且毒性也较大。
首先你要确定用什么相的色谱柱，再根据分子量大小来选择合适分子量范围的色谱柱。

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