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主题：【求助】PITC柱前衍生法测氨基酸含量

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Insp_fe2d4b63
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发表于：2018/10/24 09:42:54 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
我是参考一篇PITC柱前衍生法测黄酒中氨基酸含量的文献,方法、色谱柱都和文献一样,但是为什么我跑出来的色谱峰有很多都是一种氨基酸对应两个色谱峰。我每次衍生剂都是现配现用的，我换过一根色谱柱，结果还是一样，我不知道问题出在哪里。请大家帮忙分析分析原因，十分感谢。
如图1是我跑的四种氨基酸的标品，前面两种氨基酸都是分别对应两个色谱峰。后面两个氨基酸分别是单独的一个峰。
图2是我跑的17种氨基酸混合标品.
后面两张图是我参考的文献里面的具体洗脱方法.请各位大神给予指点.

17种氨基酸混合标品

参考的文献具体洗脱程序
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有水有渝
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2018/10/24 17:30:39 沙发 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
把你们进样浓度降低5倍再试试看，多做几次衍生，50度水浴有助于衍生更完全。另外进一个空白溶液，看看哪些是干扰峰
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毛毛虫945
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2018/11/15 17:30:09 板凳 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
样品浓度稀释到总氮为1mg/ml
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毛毛虫945
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2018/11/15 17:32:14 马扎 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 毛毛虫945(v2784615) 发表:样品浓度稀释到总氮为1mg/ml
氨基酸应该用c18的柱子效果比较好
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dadgoh
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2018/11/16 9:05:46 地毯 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
优化一下衍生化温度。
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有水有渝
xky0230699
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2018/11/16 11:33:16 地板 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 毛毛虫945(v2784615) 发表:
氨基酸应该用c18的柱子效果比较好
楼主给的文献就是Ｃ18柱，所以用的应该也是，就是不知道用的哪个厂家、什么型号的
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言逊
Insm_220b9c52
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2018/11/28 8:04:20 6楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
你试试这个流动相
A：50mM NaAC(pH6.5)-5%ACN
B：80%ACN
梯度：

时间（min）

流动相A（%，V/V）

流动相B（%，V/V）

0→2

100

0

2→15

100→85

0→15

15→25

85→10

15→90

25→30

10

90

30→32

10→100

90→0

32→40

100

0

波长、柱温、流速、进样体积不变
你这标准图谱太丑了，而且分离的效果也不好。
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2018/11/28 8:07:54 Last edit by Insm_220b9c52
p3308686
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2018/12/4 9:13:52 7楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
我刚开始做的效果和你的第一个图的峰差不多，如果操作都没有问题的话那就是柱子是不是用时间长了，分离效果不好了，我换了一根C18 250mm新柱子之后分离效果比较好
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m3169744
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2018/12/8 15:07:35 8楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
柱前衍生PITC，针对某些氨基酸是碱性氨基酸的话，需要对色谱柱封端，最好使用endcap的色谱柱，才可以不造成拖尾或者双峰。安捷伦有EC C-18的色谱柱，或者专门的氨基酸分析色谱柱，用于PITC衍生有很好的效果。waters也有，你可以看看选择这些氨基酸分析专用柱。
此外，针对双峰的问题，考虑你的衍生试剂和氨基酸的比例问题，适当增大衍生试剂的量，可能会有所改善。
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Insp_5e0bf55c
Insp_5e0bf55c
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2018/12/21 19:32:46 9楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
我最近也在做氨基酸，楼主可以留个联系方式，请教一下相关问题吗？
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爱吃鱼的狸猫
v3165349
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2019/3/29 15:15:36 10楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
我最近也做这个，楼主有什么解决办法没？
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