高效液相色谱法是采用高压输液泵将规定的流动相泵入装有填充剂的色谱柱，供试品由流动相带入色谱柱内，供试品的各组分保留时间不同，在柱内被分离并依次进入检测器中，由数据处理系统记录和处理色谱信号的色谱方法。高效液相色谱法按分离机理可分为分配色谱法、吸附色谱法、离子交换色谱法、分子排阻色谱法等类别。高效液相色谱法相较于经典液相色谱法，具有分离效能高、分析速率快、专属性强、重现性好、精密准确等特点，是分离分析领域发展最快、应用最广的方法之一。

新型高效液相色谱固定相的应用

色谱固定相是高效液相色谱系统实现复杂混合物分离的核心组成部分，高效液相色谱技术的进步主要依靠研发性能更佳的色谱固定相来实现。高效液相色谱法已成为医药、食品等领域不可或缺的分析工具。随着科学理论和实验技术的不断进步，人们对新型色谱固定相的需求日益增长，开发比现有商品柱更具优势的新型色谱柱已成为分离科学领域的研究热点。

Luo等采用将两种不同功能配体同时接枝的新策略，制备了羰基二咪唑/十二烷基双功能化色谱固定相（Sil-CDI-DD）。羰基二咪唑与长链烷基极大地提高了Sil-CDI-DD的分离效率和选择性，为不同的目标分析物提供了多个相互作用位点，有利于亲水核苷/碱基等物质的分离。

Luo等制备了一种聚n-异丙基丙烯酰胺衍生的石墨烯量子点修饰色谱固定相，该固定相可以在亲水作用和反相两种模式中进行分离，在疏水和亲水性物质的选择性分离方面具有良好的应用前景。

Zhao等人合成了一种十八胺和丝氨酸衍生的碳点功能化混合模式色谱固定相。采用反相模式分离烷基苯和多环芳烃，采用亲水作用模式分离核苷/碱基和磺胺类化合物，弥补了传统C₁₈色谱柱对极性化合物保留差的缺点。

Jiang等采用L-羟基脯氨酸对金属有机框架材料(MOFs)Co-NH₂-BDC进行修饰，制备了手性Co-NH₂-BDC-L-羟基脯氨酸材料，将该材料涂敷于硅胶表面，得到了Co-NH₂-BDC-L-羟基脯氨酸手性色谱固定相，所制备的固定相具有良好的手性拆分能力，在手性物质和苯系位置异构体的分离中具有一定的应用价值。

混合模式色谱固定相

为了弥补传统反相高效液相色谱固定相往往不适用于分离亲水性物质的这一不足，亲水作用色谱作为反相色谱的补充被提出。而单一模式色谱系统的分离机制单一，往往只适用于分离物理化学特性相近的化合物，在更复杂的应用环境中适用性较差。如何设计和制备多功能色谱固定相、在单柱上同时检测亲水和疏水性化合物已成为分析科学领域的热门研究课题。混合模式色谱应用含多种官能团的色谱固定相，可与待分离的化合物产生多种相互作用，具有两种或两种以上的保留机制，可用于多种分离模式，在针对实际情况调整分离选择性上有更高的灵活性，在实际应用中可取代两个或更多的单一模式色谱柱从而节约成本，在分离物理化学特性显著不同的复杂混合物时，相较于传统的单一模式色谱固定相，表现出更好的分离选择性、分辨率、分离效率和负载量，吸引了色谱工作者的广泛关注，目前已有大量具有良好分离性能的混合模式色谱固定相被陆续报道。通过对硅胶或聚合物等材料的表面进行适当的修饰，可以合成混合模式色谱固定相，大部分的混合模式色谱固定相是反相色谱、亲水作用色谱和离子交换色谱这三种常用分离模式的组合。混合模式色谱固定相的不断涌现极大地提高了色谱固定相的多样性。

Zhao等将3-二乙胺-1-丙炔通过点击反应与叠氮化物-二氧化硅结合，获得了一种新型的双功能混合模式色谱固定相。该固定相含有叔胺基和两个具有静电和疏水作用的乙基，在含高浓度盐的流动相中表现出疏水相互作用特性，在含低浓度盐的流动相中表现出弱阴离子交换特性，因此可分别用于分离具有弱阴离子和疏水基团的蛋白质，其分离效果可与传统的弱阴离子交换和疏水作用色谱柱相媲美。因此，合成的弱阴离子交换/疏水作用双功能混合模式色谱柱可替代两根相应的常规弱阴离子交换和疏水作用色谱柱进行蛋白质的分离。

Wang等合成了两性离子单体S-(4-乙烯基苄基)半胱氨酸（SVC），并通过可逆加成裂解链转移（RAFT）聚合使其与二氧化硅结合，得到两性离子固定相Sil-SVC。将疏水单体N-(4-苯基丁烷-2-基)丙烯酰胺（NPA）与SVC接枝到固定相（Sil-SVC-NPA）上，两种固定相均表现出反相/亲水/离子交换混合模式，在分离疏水性分析物（烷基苯和多环芳烃）、亲水性核苷碱基以及阴离子方面均表现出良好的性能。

附件：

2 LI高效液相色谱固定相的应用.docx