主题：【分享】高效液相色谱故障篇|关于保留时间的变化的小知识

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发表于：2024/09/11 11:31:56 楼主管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

假如所有的色谱条件保持一致，同一批(例如，当天相同的流动相)分析物的保留时间应该是恒定的。假如保留时间发生了改变，这就预示着至少其中一个条件发生了改变。因为我们不能保证所有的变量都恒定不变，因此，每个分析方法的保留时间都包含了正常的变动。通常来说，这个变动为保留时间的±0.5% 或±0.02~0.05分钟。这个正常的变动可从样品分析的历史记录中算出来。当保留时间的变动超过正常范围，我们就需要找出起因及作出相应的修正。

01.保留时间可能产生变化的原因
1）色谱柱性能变化：色谱柱随时间老化或受到污染，导致保留时间发生漂移。（概率大）
2）温度波动：实验室或色谱系统的温度变化会影响保留时间。（如果没配柱温箱的仪器概率大）
3）流动相组成不一致：流动相的组成（如有机溶剂比例）或pH值的微小差异会影响保留时间。（如往旧的流动相里添新配制的）（混用流动相的概率大）
4）流速变化：泵的流速不稳定或变化会影响保留时间。（概率小）
5）样品制备差异：样品的溶解度、浓度或溶剂效应可能导致保留时间变化。（概率小）
6）检测器设置：检测器的时间延迟或衰减设置不当可能导致保留时间的变化。（概率小）
7）系统死体积：系统中的死体积变化，如由于管路、接头或色谱柱更换，会影响保留时间。（概率中）
8）样品的化学变化：样品在存储或处理过程中可能发生化学变化，影响其在色谱系统中的行为。（概率小）
02.保留时间产生变化的解决方式
1）色谱柱性能变化的解决方式：避免长时间不使用色谱柱，色谱柱中保存液干涸或者长菌，可定期（如每3个月）使用适当的溶剂进行柱清洗，必要时更换色谱柱。
2）温度波动的解决方式：使用柱温箱控制色谱柱温度，保持恒温。
3）流动相组成不一致的解决方式：避免混用，现配现用。
4）流速变化的解决方式：定期校准泵流速，使用高质量的泵系统。
5）样品制备差异的解决方式：确保样品制备过程的一致性，使用适当的溶剂和浓度。
6）检测器设置的解决方式：校准检测器设置，确保参数一致。
7）系统死体积的解决方式：优化系统配置，减少死体积；如更换peek管路，最好接近长度。
8）样品的化学变化的解决方式：确保样品的稳定性和适当的存储条件。

总结一下：当我们在进行HPLC分析时，保留时间的任何变化都可能是色谱系统中某些条件改变的信号。如果色谱柱开始老化或受到污染，或者实验室的温度出现波动，甚至流动相的配比和pH值有所偏差，这些都可能导致保留时间发生漂移。此外，泵的流速不稳定、样品制备过程中的不一致性、检测器设置的误差，以及系统中的死体积变化，也都可能影响保留时间。而样品如果在处理或存储时发生了化学变化，同样会改变其色谱行为。要确保分析的准确性，就需要我们细心地维护色谱系统，及时校准设备，使用新鲜的流动相，并采取适当措施保证样品的稳定性。通过这些细致的工作，我们可以控制保留时间的变动，使其保持在可接受的范围内。