主题：【第十七届原创】解决液相色谱基线异常，看似简单，实则老费劲了！

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菜鸟分析队发表于：2024/08/16 11:27:36 楼主管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

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解决液相色谱基线异常，看似简单，实则老费劲了！

在色谱分析过程中，如果想要获得一个准确的分析结果，除了色谱出峰的峰型要好以外，和色谱基线也有很大关系，基线的波动除了会造成重复性变差，还会导致测试结果的波动。色谱分析是一项严谨的工作，作为一个分析者，需要以严谨的态度来对待每一个分析样品，对待每一张色谱图都要以审核者的角度批判的对待。

近日，在使用安捷伦1260液相对一批样品分析纯度的时候发现空白的基线有点异常，异常点在于色谱图后端，如上图所示15min~22min左右，空白基线有一些波浪起伏。可能大家觉得，只要色谱峰出峰好，即使基线有些小波浪，也不影响结果，在样品出峰的峰高下，纵坐标被压缩，这点波浪就是平整的，可以将其忽略，确实如果是测普通的目标物分析，结果影响不大，但是对于产品的纯度分析，这点波动就可能让产品介于合格与不合格之间。对于原料药，一个产品是否合格，除了关注其有效成分的含量以外，每一个杂质都需要进行分析，可能杂质超了一点点，比如百分之0.01，那就有可能造成产品不合格。

问题排查：

第一步，对于这种基线异常波动，首先想到的是压力仪器压力波动造成，于是便将选择异常时候的压力曲线与以前正常时候的压力曲线进行比对，发现压力曲线几乎是完全吻合的，所以也就排出了压力波动造成的结果。

第二步，想到的是流动相，流动相使用的是100%乙腈，100%甲醇和0.05%的磷酸水溶液，由于甲醇和乙腈都是纯溶剂，用的也是进口的品牌，也就没有过多去关注，把注意点集中在了磷酸水上，一开始猜测是磷酸的问题，于是采用不同品牌磷酸配制流动相以及仅使用纯水和有机相走空白，走出来依旧如此。

第三步，目光落在色谱柱身上，由于没有备用的新柱以及同样条件的液相，因而无法判断到底是仪器本身的问题还是色谱柱的问题，考虑到该色谱柱之前进过高浓度的样品，且使用频次很高，因而也考虑趁这次机会好好冲洗一下。将色谱柱装上另外一台老仪器上，分别用正庚烷、异丙醇、甲醇和乙腈，低流速冲洗，共耗时一天一夜。冲洗完柱子后重新装上，未有效。
注：这里走了弯路，如果有备用柱或者备用仪器，很容易判断到底是柱子问题还是仪器问题。

第四步，正好遇到工程师来维修其它仪器，便让其对仪器排查了一番，并清洗了针座等部位，然而问题依旧未解决。此时一周时间都快过去了，好在样品分析不急，不然可耽误事了。

第五步，经过上述一系列排查，基本上能搞的地方都搞了，当时也比较无奈和惆怅，也不知道到底是哪里出现的问题，后来在仪器上看看两瓶有机相也不多了，特别是甲醇，于是索性就都换了，在更换有机相的时候发现甲醇瓶中的过滤白头明显颜色不对，乙腈瓶中的过滤白头颜色是白色的，但甲醇瓶中的过滤白头颜色发深发黄。此时，自己的心里对问题的来源也有点数了。

果然在将有机相换好，以及更换了一个过滤白头之后，走出来的空白基线就好很多了。

原因分析：

通过事后调查分析，仪器上使用的那瓶甲醇不是一开始的那瓶，由于其它地方会有甲醇剩余，因而就会把多余的甲醇都加到作为流动相的甲醇瓶中，相当于一直在补加进去，久而久之甲醇可能会变质，导致过滤白头也被污染。这里也给大家提个醒，作为流动相的溶剂最好单独使用，不要混用，也不要舍不得溶剂把其它仪器上剩余的那一丁点溶剂都混到一起去来节省开支。