主题：【第十七届原创】应用MassHunter未知物分析应用5—不同极性柱子保留指数核对分析结果

应用MassHunter未知物分析应用5—不同极性柱子保留指数核对分析结果

香气样品或香精样品数据往往比较复杂，组分多，数据处理一般比较耗时费力。有自动化的数据处理就比较好了。Masshunter的未知物分析是个不错的数据自动分析软件。前面4次分别介绍应用MassHunter的未知物分析来进行处理香气样品数据，和Amdis解卷积效果对比，保留指数核对（单一非极性柱子）和与化学工作站结果对比。

回顾一下：大家知道仅仅依靠质谱图检索结果往往可能会存在不确定性。这是因为一些化合物的质谱图往往相似，特别对于一些异构体，同系物和结构特征相似的化合物，由于其质谱图非常相似，谱库检索结果匹配度，排列次序都很接近，检索给出的顺序或最佳匹配（best hit）也不一定正确。但它们的保留时间或保留指数(RI)会不同。虽然在相同的柱子上和相同的色谱条件下，两个不同的化合物的保留指数有可能相同。但两个化合物同时具有相同的保留指数（或保留时间）和相同的质谱图的不可能性极小。所以在谱库检索的基础上，用保留指数来确认结果。是一种很重要的手段。未知物分析软件通常也是给出最佳匹配结果（best hit）。如果使用保留指数进行校正来筛选就可以获得更为准确的数据分析结果。

在“应用MassHunter未知物分析处理数据3—保留指数核对分析结果”中介绍了进行保留指数核对。请参见2021年原创大赛文章。当时文章是使用NIST17质谱数据库，里面仅仅收集的是弱极性（semi-standard nonpolar）柱子的保留指数，例如-5柱子。即使最新的NIST23数据库也是收集弱极性柱子的保留指数，而没有收集极性柱子的保留指数。本篇以unknown analysis 10.1英文版为例介绍分析检索结果和不同极性柱子的保留指数校正核对。

1. 建立具有极性保留指数的数据库来进行极性柱子保留指数结果核对

1.1 建立带极性柱子的数据库

要在极性柱子上面来核对保留指数，就必须有带极性柱子的保留指数数据库。

可以在数据分析data analysis 软件，例如data analysis F版上面建立新数据库或在已有的自建库上面修改添加极性柱子的保留指数。

在spectrum菜单下面，Edit Library下面选择Add New Entry（新建）或edit existing entry（修改），在Retention Index中输入极性柱子的保留指数，或者把已经有的非极性柱子的保留指数值改成极性柱子的保留指数。OK后退出。例如下图所示：

图1 在Retention Index中输入极性柱子的保留指数

或者在library editor（谱库编辑）软件中retention index中输入或修改为极性柱子的保留指数。例如第三列，输入2078。



图2在library edit（谱库编辑）软件中retention index中输入或修改为极性柱子的保留指数

下面以英文版为例介绍检索结果的RI保留指数核对。

1.2 创建RI校正文件

首先进一针正构烷标准（一般0.05-0.1%浓度，C6-C30左右，分流比10：1-50：1左右）来得到正构烷保留值数据。然后建立保留指数表。

按照分析流程（具体详细步骤可以参考前面的第三篇原创文章），用未知物分析软件分析正构烷烃数据，得到得到鉴定核对的正构烷表（scv格式）。例如：



把数据编辑为未知物分析应用的格式，保存为rtc或csv格式。



或者把已经有现成正构烷数据，直接编辑成上面的应用格式。这里关键是保留指数和保留时间两项要准确。

1.3 未知样品数据处理，极性柱子保留指数结果核对

建立新分析或打开已有的分析，添加样品数据。 例如demo.d。编辑合适的方法，例如在library Search菜单选用DEMO_RI.L数据库。谱库检索下面的TR校正文件（RT Calibration file）添加相应的正构烷保留指数校正文件demo_RI_cal.csv，如下图：

图3 未知物分析方法设置----谱库检索

应用到所有样品或应用所选择样品，关闭close，保存方法。

右键点击Components的第一列，Add/Remove Column添加/移除列，添加Hit RI，Library RI库保留指数，这样在结果中就可以显示峰的计算保留指数和质谱库里的保留指数。也保存一下方法。

图4 添加Hit RI，Library RI库保留指数

运行分析样品：

图5 样品检索结果1

放大Components表

图6 样品检索结果2

可以看到，这四个化合物的计算保留指数和数据库里的保留指数比较吻合，可以确认。如果两者不吻合，可以选择Show Alternate hits...来选择合适的候选化合物来确认。退出前注意保存结果。

1.4 导出结果

可以在标题列右击，选Export导出结果。

图7 选Export导出结果

图8 选Export导出结果2

在保存的目录下用excel打开查看结果。


或者选择结果内容，粘贴到excel即可。

2. 原有非极性柱子保留指数的数据库添加极性保留指数来进行极性柱子保留指数结果核对

2.1 建立带极性柱子的数据库

本来考虑在数据分析data analysis 软件中，用不同的条目，例如Retention Time(RT)中添加极性柱子的保留指数。可惜在未知物分析中的Library TR显示出来是实际样品的化合物的保留指数，而不是数据库里的RT值。这个是软件的一个bug。此路不通。

只好考虑使用library editor（谱库编辑）软件。在retention index中保留或输入非极性柱子的保留指数。在description中输入极性柱子的保留指数值。如下图所示。这样数据库中就有两种极性柱子的保留指数了。

图9  在description中输入极性柱子的保留指数值

2.2 按照1.2和1.3的步骤进行保留指数表建立和结果检索等。包括选用数据库文件。在显示列中添加Library compounds Description（即Library Edit中description中输入极性柱子的保留指数值）。

图10 在显示列中添加Library compounds Description

这样在检索结果中就可以看到Hit RI（未知物测定RI）和极性柱子的数据库RI值（Library Compounds description列）的对比了。同时也保留了原来非极性柱子的保留指数值（Library RI）。



3. 用script（脚本）来编辑小程序来实现多极性柱子保留指数对比。（略，后期再写）

全文完。