主题：【第十一届原创】食品及饲料中三聚氰胺的快速测定（LCMSMS法）

本方法可以针对奶粉，粉状食品冲剂等和NY/T 1372-2007中的饲料中三聚氰胺的测定进行快速筛查，看结果是否超过2.0mg/kg，若超过可以再用HPLC或指定方法进行确认。

具体测定过程如下：

• 标准品配置
  
  

• 三聚氰胺内标（¹³C₃）储备液（1mg/mL）：准确称取¹³C₃标记的三聚氰胺标准品10.00mg于10mL容量瓶中，用超纯水定容至刻度，4℃避光保存，有效期为1年
  

1.1 三聚氰胺内标（¹³C₃）中间液（10μg/mL）：用100 µL移液枪吸取¹³C₃标记的三聚氰胺储备液(1mg/mL)100μL至10 mL的容量瓶中，用乙腈定容至刻度，4℃避光保存，有效期为3个月。

• 三聚氰胺储备液（1mg/mL）：准确称取三聚氰胺标准品10.00mg于10mL容量瓶中，用50%乙腈水定容至刻度，4℃避光保存，有效期为1年。
  

2.1 三聚氰胺标准品中间液（10μg/mL）：用100 µL移液枪吸取三聚氰胺储备液(1mg/mL)100μL至10 mL的容量瓶中，用乙腈定容至刻度，4℃避光保存，有效期为3个月。
3.  标准曲线：分别移取三聚氰胺标准品中间液（10μg/mL）适量用80%乙腈水配置成10ng/mL、20ng/mL、50ng/mL、100ng/mL、200ng/mL、500 ng/mL标准工作溶液，并加入一定体积的三聚氰胺内标（¹³C₃）中间液（10μg/mL），保证标准曲线溶液内标浓度为100ng/mL。
（二）样品前处理
准确称取样品0.2000g于50mL离心管中，加入三聚氰胺内标（¹³C₃）中间液（10μg/mL）200μL，再加入20mL 80%乙腈水溶液，超声波提取30min，10000rpm离心3min，取上清液过0.22μm滤膜后供LCMSMS分析。
（三）仪器条件
1.液相条件
色谱柱：HILIC 10cm x 1.7 μm
梯度洗脱程序如表1所示：

表1 液相梯度洗脱条件

                                                                     

时间/min	流速mL/min	A%（5mM乙酸铵水溶液含0.1%氨水）	B%(乙腈)
0	0.4	5	95
0.5	0.4	5	95
1	0.4	60	40
2	0.4	60	40
2.5	0.4	5	95
5	0.4	5	95

2.质谱条件
2.1 电离模式：ESI正离子
2.2 扫描模式：MRM多反应离子监测
2.3 特征离子如表2所示：

表2 特征离子参数

                                   

化合物	母离子	定量子离子	定性子离子	碰撞能（ev）
三聚氰胺	127	85	68	18/20
13C3标记三聚氰胺内标	130	87	/	18

（四）结果计算

X=CV/W/1000

式中X：样品含量，mg/kg
    C：机读数，ng/mL
    V：溶液体积，20mL
    W：样品质量，g
（五）质控
1. 同时做方法空白和加标实验。方法空白<1mg/kg,仪器至多间隔10针进1针方法空白。
2. 标准曲线的回归系数大于等于0.995.
3. 样品加标试验的回收率在70%-130%。
4. 超过定量限的样品，进行双样定量分析, 相对百分比差值小于20％，也可以再用HPLC或指定方法进行确认。
5. 同一批样品相同基质的至少选取一个样品做平行样。
（六）注意事项
1. 样品在超声提取前要涡旋振荡混匀，保证样品充分溶解。
2. 若样品含油脂在提取前可加入一定体积(10-20mL)乙腈饱和正己烷去油，离心后取下层乙腈水层过滤膜后测定。