主题：【讨论】蒜薹、青椒、柑橘、葡萄中仲丁胺残留量测定

蒜薹、青椒、柑橘、葡萄中仲丁胺残留量测定
1 范围
    本标准规定了蒜薹、青椒、柑橘、葡萄中仲丁胺（2-AB）残留量的检测方法。
    本标准适用于蒜薹、青椒、柑橘、葡萄中仲丁胺残留量的测定，其他果品蔬菜中仲丁胺残留量的测定可参照本标准。
    本方法的最低检出限量为0.672mg/kg，测定浓度范围为0.672mg/kg～20.000mg/kg。
2 原理
    通过水蒸气蒸馏，将样品中仲丁胺和其他挥发性胺类分离，用四氯化碳（CCL₄）洗涤，除去干扰物质，在硼砂缓冲液中2-AB与2,4-二硝基氟苯（DNFB）反应，生产N-仲丁基-2,4-二硝基苯胺（BDNA），加减水解除去多余试剂，用环己烷萃取BDNA，经薄层色谱分离、净化，将2-AB色斑用三氯甲烷溶脱，用紫外/可见分光光度计在332nm处测定。
3 试剂与材料
    除非另有说明，所用的试剂均为分析纯，所用的水均为无离子水。
3.1 氧化镁固体
3.2 无水硫酸钠
3.3 正己烷
3.4 乙醚
3.5 三氯甲烷
3.6 四氯化碳
3.7 苯
3.8 1,4-二氧六环
3.9 1 mol/L氯化钙溶液
    称取氯化钙（CaCl₂）110.9g，溶于水中，定容至1000mL。
3.10 0.05 mol/L四硼酸钠
    精确称取四硼酸钠19.07g，溶于蒸馏水，定容至1000mL。
3.11 0.2 mol/L硼酸
    精确称取硼酸12.37g，溶于蒸馏水，定容至1000mL。
3.12 硼酸盐缓冲液
    将硼砂溶液与硼酸溶液按8+2比例混合制成硼酸盐缓冲液。
3.13 2mol/L氢氧化钠溶液
    准确称取8.00g氢氧化钠（NaOH），溶解定溶于100mL蒸馏水。
3.14 0.3 mol/L氢氧化钠溶液
    准确称取1.20g氢氧化钠（NaOH），溶解定溶于100mL蒸馏水。
3.15 0.05mol/L碳酸钠溶液
    准确称取5.30g碳酸钠（Na₂CO₃），溶解定溶于1000mL蒸馏水。
3.16 0.15mol/L硫酸溶液
    准确吸取9mL硫酸（H₂SO₄），溶解定容于1000mL蒸馏水。
3.17 2,4-二硝基氟苯（DNFB）
    在50mL蒸馏后的1,4-二氧六环中溶解0.75mL 2,4-二硝基氟苯（2,4-dinitrofluorobenzene）（简称DNFB）（当天配制）。
3.18 环己烷
    将500mL环己烷通过长125mm、直径25mm、填充粒径为0.2mm-0.5mm硅胶的层析柱层析，弃去开始的25mL，其余收集于干燥洁净的试剂瓶中。
3.19 仲丁胺标准溶液（100μg/mL）
    精确吸取14μL标准仲丁胺原液，用蒸馏水定容至100mL。
3.20 仲丁胺标准使用液（100μg/mL）
    精确吸取上述仲丁胺标准溶液10mL，用蒸馏水定容至100mL。
4 仪器
4.1 高速电动组织捣碎机；
4.2 恒温水浴锅（60℃±2℃）；
4.3 水蒸气蒸馏装置；
4.4 薄层板：硅胶G（0.25mm）；
4.5 紫外-可见分光光度计；
4.6 旋转蒸发仪。
5 操作方法
5.1 样品处理
    将果蔬样品切成小块，用组织捣碎机捣成浆状，称取50g匀浆，精确到0.1g，置于800mL蒸馏瓶中，依次加入75mL 1mol/L CaCl₂溶液、10gMgO与50mL水制成的浆状物，并用100mL水冲洗瓶壁，转动使之混合均匀。将蒸馏瓶连到水蒸气蒸馏装置上进行蒸馏，用装有10mL 0.15mol/L H₂SO₄溶液的带刻度的100mL烧杯接受馏出液约80mL，再用0.3mol/LNaOH溶液将蒸馏液调到pH=7（用pH计），最后用蒸馏水定容至100mL备用。
5.2 标准工作曲线的绘制
5.2.1 吸取仲丁胺标准使用液（3.19）0.0mL、1.0mL、2.0mL、4.0mL、6.0mL、8.0mL和10.0mL（相当于0.0μg、10.0μg、20.0μg、40.0μg、60.0μg、80.0μg、100.0μg），分别置于50mL具塞锥形瓶中，加蒸馏水至10mL。
5.2.2 分别加入5mL硼酸盐缓冲液和2mL DNFB试剂，置60℃水浴反应30min，再加入2mL2mol/L NaOH溶液，继续恒温30min。将锥形瓶置于冰浴中冷却，在分液漏斗中用10mL环己烷萃取，弃去下层水相，再用15mL 0.05mol/L Na₂CO₃溶液洗涤环己烷萃取液，重复三次。将环己烷萃取液转移到50mL具塞锥形瓶中，加入2g无水硫酸钠，轻轻振摇，用气流蒸发除去溶剂，加入0.2mL苯将仲丁胺干燥物溶解。迅速将50μL上述溶液点在同一块薄层板上，用正己烷-乙醚（70+30）作展开剂一次展开，刮下待测组分斑点，用三氯甲烷溶解，并定容至5mL，于332nm处测吸光值，绘制标准曲线。
5.3 样品测定
    吸取样品溶液10mL置于50mL梨形分液漏斗中，用15mL CCl₄洗涤样品溶液，重复三次。然后转入50mL具塞锥形瓶中，以下按5.2.2方法操作，测定吸光度。从标准曲线上查出仲丁胺的残留量（μg）。
6 结果的表述
6.1 计算
计算见公式（1）
………………………………………………（1）
式中：
X——样品2-AB的含量，单位为毫克每千克，mg/kg；
c——在标准曲线上所查得的2-AB的含量，单位为微克，μg；
V₁——点样体积，单位为毫升，mL；
V₂——点半前苯的定容体积，单位为毫升，mL；
V₃——吸取的样品蒸馏液体积，单位为毫升，mL；
V₄——样品蒸馏液总体积，单位为毫升，mL；
m——样品质量，单位为克，g。
计算结果表示到小数点后三位。
6.2 青椒、蒜薹、柑橘、葡萄检测的相对标准偏差RSD为3.4%～6.7%。
6.3 青椒、蒜薹、柑橘和葡萄的回收率为85%～101%。