蒜薹、青椒、柑橘、葡萄中仲丁胺残留量测定
1 范围 本标准规定了蒜薹、青椒、柑橘、葡萄中仲丁胺(2-AB)残留量的检测方法。
本标准适用于蒜薹、青椒、柑橘、葡萄中仲丁胺残留量的测定,其他果品蔬菜中仲丁胺残留量的测定可参照本标准。
本方法的最低检出限量为0.672mg/kg,测定浓度范围为0.672mg/kg~20.000mg/kg。
2 原理 通过水蒸气蒸馏,将样品中仲丁胺和其他挥发性胺类分离,用四氯化碳(CCL
4)洗涤,除去干扰物质,在硼砂缓冲液中2-AB与2,4-二硝基氟苯(DNFB)反应,生产N-仲丁基-2,4-二硝基苯胺(BDNA),加减水解除去多余试剂,用环己烷萃取BDNA,经薄层色谱分离、净化,将2-AB色斑用三氯甲烷溶脱,用紫外/可见分光光度计在332nm处测定。
3 试剂与材料 除非另有说明,所用的试剂均为分析纯,所用的水均为无离子水。
3.1 氧化镁固体
3.2 无水硫酸钠
3.3 正己烷
3.4 乙醚
3.5 三氯甲烷
3.6 四氯化碳
3.7 苯
3.8 1,4-二氧六环
3.9 1 mol/L氯化钙溶液
称取氯化钙(CaCl
2)110.9g,溶于水中,定容至1000mL。
3.10 0.05 mol/L四硼酸钠
精确称取四硼酸钠19.07g,溶于蒸馏水,定容至1000mL。
3.11 0.2 mol/L硼酸
精确称取硼酸12.37g,溶于蒸馏水,定容至1000mL。
3.12 硼酸盐缓冲液
将硼砂溶液与硼酸溶液按8+2比例混合制成硼酸盐缓冲液。
3.13 2mol/L氢氧化钠溶液
准确称取8.00g氢氧化钠(NaOH),溶解定溶于100mL蒸馏水。
3.14 0.3 mol/L氢氧化钠溶液
准确称取1.20g氢氧化钠(NaOH),溶解定溶于100mL蒸馏水。
3.15 0.05mol/L碳酸钠溶液
准确称取5.30g碳酸钠(Na
2CO
3),溶解定溶于1000mL蒸馏水。
3.16 0.15mol/L硫酸溶液
准确吸取9mL硫酸(H
2SO
4),溶解定容于1000mL蒸馏水。
3.17 2,4-二硝基氟苯(DNFB)
在50mL蒸馏后的1,4-二氧六环中溶解0.75mL 2,4-二硝基氟苯(2,4-dinitrofluorobenzene)(简称DNFB)(当天配制)。
3.18 环己烷
将500mL环己烷通过长125mm、直径25mm、填充粒径为0.2mm-0.5mm硅胶的层析柱层析,弃去开始的25mL,其余收集于干燥洁净的试剂瓶中。
3.19 仲丁胺标准溶液(100μg/mL)
精确吸取14μL标准仲丁胺原液,用蒸馏水定容至100mL。
3.20 仲丁胺标准使用液(100μg/mL)
精确吸取上述仲丁胺标准溶液10mL,用蒸馏水定容至100mL。
4 仪器4.1 高速电动组织捣碎机;
4.2 恒温水浴锅(60℃±2℃);
4.3 水蒸气蒸馏装置;
4.4 薄层板:硅胶G(0.25mm);
4.5 紫外-可见分光光度计;
4.6 旋转蒸发仪。
5 操作方法5.1 样品处理
将果蔬样品切成小块,用组织捣碎机捣成浆状,称取50g匀浆,精确到0.1g,置于800mL蒸馏瓶中,依次加入75mL 1mol/L CaCl
2溶液、10gMgO与50mL水制成的浆状物,并用100mL水冲洗瓶壁,转动使之混合均匀。将蒸馏瓶连到水蒸气蒸馏装置上进行蒸馏,用装有10mL 0.15mol/L H
2SO
4溶液的带刻度的100mL烧杯接受馏出液约80mL,再用0.3mol/LNaOH溶液将蒸馏液调到pH=7(用pH计),最后用蒸馏水定容至100mL备用。
5.2 标准工作曲线的绘制
5.2.1 吸取仲丁胺标准使用液(3.19)0.0mL、1.0mL、2.0mL、4.0mL、6.0mL、8.0mL和10.0mL(相当于0.0μg、10.0μg、20.0μg、40.0μg、60.0μg、80.0μg、100.0μg),分别置于50mL具塞锥形瓶中,加蒸馏水至10mL。
5.2.2 分别加入5mL硼酸盐缓冲液和2mL DNFB试剂,置60℃水浴反应30min,再加入2mL2mol/L NaOH溶液,继续恒温30min。将锥形瓶置于冰浴中冷却,在分液漏斗中用10mL环己烷萃取,弃去下层水相,再用15mL 0.05mol/L Na
2CO
3溶液洗涤环己烷萃取液,重复三次。将环己烷萃取液转移到50mL具塞锥形瓶中,加入2g无水硫酸钠,轻轻振摇,用气流蒸发除去溶剂,加入0.2mL苯将仲丁胺干燥物溶解。迅速将50μL上述溶液点在同一块薄层板上,用正己烷-乙醚(70+30)作展开剂一次展开,刮下待测组分斑点,用三氯甲烷溶解,并定容至5mL,于332nm处测吸光值,绘制标准曲线。
5.3 样品测定
吸取样品溶液10mL置于50mL梨形分液漏斗中,用15mL CCl
4洗涤样品溶液,重复三次。然后转入50mL具塞锥形瓶中,以下按5.2.2方法操作,测定吸光度。从标准曲线上查出仲丁胺的残留量(μg)。
6 结果的表述6.1 计算
计算见公式(1)
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………………………………………………(1)
式中:
X——样品2-AB的含量,单位为毫克每千克,mg/kg;
c——在标准曲线上所查得的2-AB的含量,单位为微克,μg;
V
1——点样体积,单位为毫升,mL;
V
2——点半前苯的定容体积,单位为毫升,mL;
V
3——吸取的样品蒸馏液体积,单位为毫升,mL;
V
4——样品蒸馏液总体积,单位为毫升,mL;
m——样品质量,单位为克,g。
计算结果表示到小数点后三位。
6.2 青椒、蒜薹、柑橘、葡萄检测的相对标准偏差RSD为3.4%~6.7%。
6.3 青椒、蒜薹、柑橘和葡萄的回收率为85%~101%。