依据《中国药典》一部对沉香药材中沉香四醇含量测定及特征图谱建立实验中发现：同一台仪器，同一支色谱柱，不同流速对沉香四醇峰面积影响差异较大。具体的实验过程分享如下：
1. 仪器
液相色谱仪-二极管阵列检测器
2. 色谱条件
2.1特征图谱色谱条件与系统适用性试验：Phenomenex luna C18 (250*4.6mm*5μm) ；以乙腈为流动相A，以0. 1%甲酸溶液为流动相B，按下表中的规定进行梯度洗脱；流速为0.7 mL/min；柱温为30 ℃ ，检测波长为252nm，进样量10μL。理论板数按沉香四醇峰计算应不低于6000。
表1 特征图谱色谱条件

2.2 含量测定色谱条件与系统适用性试验：Phenomenex luna C18 (250*4.6mm*5μm) ；以乙腈为流动相A，0. 1%甲酸溶液为流动相B，按下表中的规定进行梯度洗脱；柱温为30 ℃ ，检测波长为252nm，流速为1.0 mL/min，进样量10μL；理论板数按沉香四醇峰计算应不低于6000。
表2 含量测定色谱条件

3 对照品溶液的制备
取沉香四醇对照品适量，精密称定，加乙醇制成每64.07μg/mL的溶液，即得。
4 供试品溶液的制备
取本品粉末（过三号筛）约0.2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入乙醇10ml，称定重量，浸泡 0 .5小时，超声处理（功率 250W，频率 40k HZ ) 1小时，放冷，再称定重量，用乙醇补足减失的重量，摇匀，静置，取上清液滤过，取续滤液，即得。
5 样品测定
分别在2.1，2.2色谱条件下分析同一浓度沉香四醇对照品溶液和同一样品溶液。
6 结果
6.1 特征图谱分析条件下对照品和样品色谱图及沉香四醇峰面积

图1 特征图谱分析条件下对照品保留时间及峰面积

图2 特征图谱分析条件下样品中沉香四醇保留时间及峰面积
6.2 含量测定分析条件下对照品和样品色谱图及沉香四醇峰面积

图3 含量测定分析条件下对照品保留时间及峰面积图

图4 含量测定分析条件下样品中沉香四醇保留时间及峰面积

6.3 考察沉香四醇在Phenomenex luna C18 和Eclipse C18峰面积差异

图5 含量测定分析条件下Phenomenex luna C18柱对照品保留时间及峰面积

图6 含量测定分析条件下Eclipse C18柱对照品保留时间及峰面积
7 讨论
不同条件下沉香四醇保留时间及峰面积见表3，从表中看出，不同的液相色谱流动相洗脱程序对沉香四醇峰面积影响较大，不同厂家相同填料的色谱柱沉香四醇峰面积无显著差异。可见液相色谱含量测定一定要尊重实验事实，不同洗脱条件下的峰面积没有必然联系，可能对于有的化合物洗脱程序对其峰面积影响不大，但本实验中沉香四醇在不同的流动相洗脱程序下峰面积差异显著，可能是沉香中其他色谱峰对其有干扰，通过与大家分享分析沉香时的经验，切记：中药材含量测定对照品溶液一定要与供试品溶液在完全相同的分析条件下分析，含量测定才准确！！！
表3 不同条件下沉香四醇保留时间及峰面积

分析条件	对照品保留时间	对照品峰面积	样品保留时间	样品峰面积
特征图谱	20.255	2337937	20.212	11470559
含量测定	15.374	1632658	15.389	8031397
Eclipse C18	12.962	1690579	/	/