主题：【原创】His镍柱标签蛋白纯化，就是这么简单

简 介
1975年，Porath等人提出了一种新的纯化方法-固定化金属鳌合层析，利用金属离子（Ni2+，Cu2+等）与氨基酸表面的残基（如组氨酸的咪唑基）的配位鳌合作用，来纯化与金属离子有亲和作用的蛋白质。
组氨酸标签由于分子量小，几乎不干扰靶蛋白的功能、活性和结构而被广泛的使用。固定的金属离子亲和层析是纯化组氨酸标签蛋白的最常用方法。
组氨酸标签蛋白的纯化工具
月旭Ni亲和填料Ni Tanrose 6FF（NTA）
Ni Tanrose 6FF（NTA）亲和介质是将金属离子Ni2+鳌合在以氨三乙酸为配基的6%高度交联的琼脂糖凝胶上形成的亲和层析介质。月旭科技研发的Ni Tanrose 6FF（NTA）不仅纯化纯度较高，通过控制合理的Ni离子密度，结合载量可达到～40mgHis标签蛋白/ml介质，可以用于各种表达来源（如大肠杆菌、酵母、昆虫细胞和哺乳动物细胞）的组氨酸标签（6xHis-tagged）蛋白的纯化。NTA含有四个螯合区，较一般的三齿螯合剂能更好的结合Ni2+。6xHis可与Ni2+螯合，从而使His标签蛋白结合在Ni Tanrose 6FF（NTA）纯化介质上，未结合的蛋白被洗涤下去，结合在介质上的蛋白经过一定浓度的咪唑或低pH缓冲液被温和的洗脱下来，从而得到高纯度的目标蛋白。具有载量高、选择性好、易于再生、成本低等优点。有了它，再也不用担心完不成纯化任务了。
PreCot Ni 6FF（NTA）是Ni Tanrose 6FF（NTA）的1ml和5ml预装柱，用来纯化6xHis-tagged蛋白，可以使用注射器、蠕动泵，或者液相层析系统（例如AKTA或FPLC）。
Ni Tanrose 6FF（NTA）应用案例

预装柱：PreCot Ni 6FF（NTA） 5ml
样品：含有His标签蛋白（大肠杆菌表达）
平衡液A：50mM Tris-HCl，0.5M NaCl,20mM咪唑pH8.0
洗脱液B：50mM Tris-HCl，0.5M NaCl，0.5M 咪唑，pH8.0
流速：平衡、洗脱-1.0ml/min上样-0.5ml/min

PreCot Ni 6FF（NTA）纯化His标签蛋白的纯化色谱图

备注：1-3（样品和平衡液中不含咪唑）；

4-6（样品和平衡液中含20mM咪唑）

1：原液
2：流穿
3：洗脱（100%B）
4：原液
5：流穿
6：洗（100%B）

由于宿主蛋白中也存在组氨酸和/或半胱氨酸氨基酸残基，其他的非特异性蛋白与靶蛋白一起与金属离子亲和层析填料结合，造成纯化样品纯度不高。提高样品中的咪唑浓度，组氨酸标签蛋白通过Ni Tanrose 6FF（NTA），可以一步纯化得到85%以上纯度的纯化样品。

     

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